低溫樣品儲存,液氮凍存(一)

2021-02-13 Shinetek桑翌
氮氣作為空氣的主要成分（78%，V/V），具有很大的利用來源。其中一個主要用途是將氣態液氮進行液化，進行液氮儲存。


氣相和液相儲存

液氮，液態的氮氣，惰性無色無味。液氮罐內的液氮在-196攝氏度以下呈現的是液體狀態，一旦超過-196攝氏度以上就會沸騰變成氣體的狀態了，一旦低於-196攝氏度就會呈現結冰固態的現象，因此液氮的的狀態一定要控制在一定的溫度內，常壓下液態氮氣為-196℃到-210℃之間。而同時存在容器中的氣態液氮在接近液體的層面大概溫度在-170℃到-180℃，而在容器口的層面液氮也有-80以下。因此當進行樣品保存時，分為兩種：一種液相儲存，即盛放樣品的容器要直接和液氮進行接觸，這樣才能保證樣品的適當溫度儲存；另外一種氣相儲存，樣品直接放入液氮罐的空氣中，這樣就直接能夠保證樣品（生物樣品等）的儲藏溫度的要求。

運輸罐和儲存罐

儲存液氮罐，液氮保存時間長，適用於靜置室內長時間保存活性生物材料。

運輸液氮罐，一般體積和容量相對來說更大，在內膽加設了支承，耐運輸和振動，適用於室內靜置和長途運輸兩用。

剩餘液氮的檢測

當使用液氮罐比較關心的液氮是否能夠使用多久，以及如何檢測液氮罐的剩餘液氮的體積。由於液氮的超低溫和常規的室溫的巨大差距，因此液氮罐中的液氮受熱（雖然有真空隔離層）會產生揮發。液氮罐的日蒸發量也是衡量液氮罐好壞的一個重要參數，當然這個數據只是液氮罐中液氮蒸發的平均量，實際使用過程中，液氮揮發量會多，然後逐漸降低。在使用過程中需要時刻觀察液氮的剩餘量，在出廠前可以提前配製液氮高低位報警，保證能夠隨時提醒剩餘液氮不足。如果沒有配製液位報警，可以在用實心塑料小棒或實心小木棒插入液氮罐底部，過5-10s後取出，結霜的長度既是液面高度（做好防護工作）。千萬不要用空心棒或塑料管，以防液氮從管內噴出傷人。當液氮剩餘不多時，液氮罐口會有冷凝水或者含有白色的結霜現象，此時需要及時補充液氮或者更換液氮罐。因此根據自己的實際需求，選擇合適的液氮罐，才能保證實驗順利進行

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  • 來自ATCC的《哺乳動物細胞凍存指南》,請查收
    合適的儲存溫度以下程序針對典型的哺乳動物貼壁細胞。通常，增加凍存培養基中的血清濃度來增加難以保存細胞的存活率。有時使用高達90％至95％的血清濃度（無培養基，僅血清加上低溫保護劑）。A 用凍存培養基重懸細胞，使最終細胞濃度達到每毫升2-5百萬個活細胞。B 在凍存管上標記好細胞名稱，編號和凍存日期等信息。然後將1.0到1.8毫升的細胞懸液加入到細胞凍存管中並密封。
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