關於細胞濃度對凍存效果影響的研究

2020-10-18 中科博生

具研究表明，一般認為骨髓（bone marrow,BM）造血幹細胞凍存常用的濃度為(2～4)×10'個/ml(Rowey 1992)。

而對於外周血造血幹細胞(peripheral bloodhematopoietic stem cell,PBHSC)的移植來說,由於採集的細胞數量較多,如果按上述濃度加以凍存,會造成回輸大量含有DMSO的細胞懸液,產生臨床不良反應。

劉錦麗等(1998)使用速率降溫儀對13份 PBHSC和7份 BM造血幹細胞凍存。其凍存程序為:先在4℃冰箱擱置30min,然後加入預冷的含10% DMSO的凍存保護液,以1℃/min降到-35℃,再以5℃/min 降到-80℃,最後投人液氮中保存。BM造血幹細胞的密度為2×108個/ml,PBHSC分成密度為10'個/ml 的對照組和10個/ml的實驗組。結果表明對照組凍存的 PBHSC其有核細胞回收率為81.1%士9.9%,CFU-GM存活率為77.0%土11.5%,臺盼藍拒染率為81.3%±11.9%;實驗組凍存的 PBHSC 復甦後有核細胞回收率為 81.1%±9.9%,CFU-GM存活率為43.5%士12.3%,臺盼藍拒染率為77.0%士7.8%。

3組數據的統計學檢測無意義（p>0.05)。如果 PBHSC也以推薦的 BM 造血幹細胞的凍存密度,即(2～4）×10'個/ml,進行凍存,那麼凍存後的總容積為31左右,由於凍存保護劑中含有 DMSO),大量輸入人體後會造成毒害性不良反應,如高血壓、頭痛、心率失常等。

Rowley等（1994）探討了細胞濃度對造血幹細胞凍存效果的影響他們從30位患者身上抽取了108份 PBHSC樣品,有核細胞凍存濃度為(3.7+1o、10³個/ml[（0.4～8.0)×10³個/ml],容量為127士45ml,結果復甦後有核細購同收率為75.4%士13.0%(43.2%～102.8%）,CFU-GM回收率為 45.3%+45.9%.BFU-E為48.8%士33.9%。

統計學分析表明,細胞濃度在2×10*個/ml以上時,復溫後細胞回收率無明顯差異,而且可以使凍存的總容積減少,減少患者回輸後的負荷並減少DMSO相關毒性不良反應的發生。

相關焦點

  • 細胞凍存秘籍,你學會了嗎?
    看似簡單的凍存細胞，如果操作不當，將導致長期培養的細胞付之東流。小編將來自ATCC的《哺乳動物細胞凍存指南》翻譯為中文。看大拿們如何凍存細胞。養細胞的小夥伴不容錯過。細胞凍存是否成功取決於四個關鍵因素：        1. 適當的處理及溫和收集細胞        2.
  • 來自ATCC的《哺乳動物細胞凍存指南》,請查收
    看似簡單的凍存細胞，如果操作不當，將導致長期培養的細胞付之東流。小編將來自ATCC的《哺乳動物細胞凍存指南》翻譯為中文。看大拿們如何凍存細胞。養細胞的小夥伴不容錯過。細胞凍存是否成功取決於四個關鍵因素：1. 適當的處理及溫和收集細胞2. 使用合適的冷凍保護劑3. 細胞凍存的速率4.
  • 幹細胞凍存與復甦研究的歷史_中科博生
    具中科博生研究表明，幹細胞的凍存及復甦是幹細胞研究中的一個重要課題。它對於減少細胞傳代及培養時在培養用具、培養液、無菌操作及準備工作等方面所花費的人力和物力，防止細胞因傳代過多而發生變異或死亡，隨時取用於臨床及科研工作，大規模的應用於商業及工業生產有著極為重要的意義。中科博生。
  • 加速卵母細胞凍存材料產業化，破譯生物「冷凍-復活」密碼
    不過，王健君表示，這種方法存在兩個明顯弊端，一是在零下140多度的低溫下想達到效果，需要添加的分子濃度高達50%-60%，很難找到符合條件的材料；二是向細胞中添加如此多的物質，也會一定程度破壞細胞原有的結構，而如二甲基亞碸有一定的毒性。
  • 幹細胞的凍存速率_中科博生
    具中科博生研究表明，細胞在冰凍時，形成冰晶的部位和樣品冰凍前的溫度、細胞的特性有關，尤其是和冰凍速率有關。在-80℃時，細胞酶的活動停止，生理活動趨於停頓；在-196℃條件下，細胞的分子運動完全受到抑制，細胞全部的生理和生化反應停止。
  • 液氮凍存細胞應注意哪些問題
    當我們的液氮罐內存放細胞的時候，需要在低溫液氮的環境下才能維持細胞的活性，但是細胞長的太過培養液出現很黃的現象，細胞可能出現汙染現象，這時候細胞已經開始凋亡或者崩解。遇到這類現象我們應該採用哪種方法解決呢？
  • 紅細胞的凍存
    （2）紅細胞的冷凍保存其降溫方法一般有3種,即高濃度甘油慢凍法、低濃度甘油速凍法及玻璃化|低溫保存法。高濃度甘油慢凍法 甘油濃度為40%,甘油中含有乳酸鈉、氯化鉀、氯化鈣、甘露醇或乳糖等,並使溶液 pH維持在6.8左右。在5～6min 內將細胞降溫至一80℃以下,細胞解凍後存活率一般為80%～90%。
  • 細胞凍存方法、步驟及注意事項
    而且它必須是是在無汙染的條件下培養，復甦才能保證實驗效果。二、步驟：（1）冷凍前一日前更換半量或全量培養基，觀察細胞生長情形。（2）配製冷凍保存溶液（使用前配製）：將DMSO加入新鮮培養基中，*後濃度為5～10％，混合均勻，置於室溫下待用。
  • Gibco Recovery細胞凍存培養基: 便捷即用的凍存方案
    它可以為您提供便捷即用的細胞凍存方案：✦ 提高細胞復甦率——復甦後的細胞存活率更高✦ 更快獲得實驗結果——獲得更多活細胞，您可以儘快開始實驗✦ 即用型凍存混合物——無需使用多種成分進行配製✦ 提高安全性——無需處理和混合DMSORecovery細胞凍存培養基是一種完整的即用型凍存培養基，用於冷凍保存各種哺乳動物細胞，助您提高細胞復甦率
  • 噓~教你如何一步法凍存細胞
    大家都知道，細胞凍存和復甦的原則：慢凍快融。當細胞冷到零度以下，細胞器脫水，細胞中可溶性物質濃度升高，並在細胞內形成冰晶。
  • 儲存10年,20年,還是「永久」,細胞到底能凍存多久?
    細胞到底可以凍存多久？提起臍帶血，大多數人並不陌生，臍帶血對於儲存溫度和儲存環境的要求非常高，只有深低溫凍存狀態下才能使細胞處於休眠狀態，細胞中的酶被抑制，不會發生電離損傷，才可長期凍存。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。
  • 王健君：實證百年科學猜想，人體凍存未來可期
    ，提出了完全不同的議案，有些人支持卵母細胞的凍存，而另外一些代表則完全反對卵母細胞的凍存；2016年英國法院判決一個患有絕症的14歲女孩的母親勝訴，允許這位母親在其女兒死後將其凍存。理論研究發現，如果將器官置於零下140℃的時候，可以長期的保持。事實上，目前有些細胞，將其置於零下196℃的液氮環境當中的時候，可以實現長期的凍存。可是很遺憾的是，目前還沒有凍存器官的技術。所以導致保存器官的時間很短，幾個小時、長的二十來個小時，導致了大量的器官被廢棄。
  • 中科博生關於幹細胞低溫保存液的研究
      具中科博生研究發現，細胞離體後,由於失去了神經和體液的調節,生理、生化代謝環境變更和活動規律變化,以及各種營養物質供應的中斷為了保持離體細胞的活力,延長其壽命,並提供其所需的營養和生活環境,人們模擬體液或胞內液,配製了各種保存液。此外,在低溫冷凍前的預處理中,通常在保存液中加入低溫保護劑,形成所需的低溫保護液濃度。中科博生。(1)保存液的組成保存液的組成,因各種細胞、組織和器官的特點的不同而不同,基本上可以分為以下3種。
  • 如何高效復甦細胞？這四點要注意
    細胞復甦流程從液氮罐中取出凍存細胞，放入37℃水浴鍋中融化，輕柔離心後收集細胞沉澱；緩慢用移液槍吸去上清，加入適量濃度和體積的完全培養基，重懸細胞沉澱，轉移至細胞培養皿因為一旦凍存管中有液氮流入，直接放入水浴鍋中，管內壓力驟升，可能導致凍存管炸裂，危及實驗人員。復甦細胞的核心技術，簡而言之就是快融。從液氮罐中取出的細胞，需及時放入37℃水浴鍋，進行快速融化，期間需不停地輕柔搖晃凍存管。最好在兩分鐘內完全融化細胞。
  • 獨家珍藏|細胞培養攻略,了解這些細胞培養變得更簡單!
    當細胞生長狀況較好或者代數較早時，需及時大量的凍存。細胞凍存液比例為培養基：血清：DMSO=7:2:1，也可血清：DMSO=9:1。細胞凍存密度通常為1-3×106個/ml。細胞凍存採用慢凍方式，減少冰晶形成，避免細胞損傷。通常4℃放置0.5 h，-20℃放置2 h，-80℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。
  • 如何成為細胞培養大神?
    事實是，支原體汙染會影響細胞代謝，改變細胞功能等。  藥典檢測支原體是培養法，時間以周記，這顯然不符合科研」快」的需求。胰酶的使用胰酶適合大部多數細胞的消化：HEK293，CHO，HeLa等，而這類細胞我們往往將他定義為「糙」。當然，細胞本身肯定是不糙的，同樣相當金貴。只不過這些細胞對胰酶的耐受性好，一定濃度下的胰酶對細胞狀態影響不大。
  • 「20年」還是「永久」 臍帶血究竟能凍存多久?
    提起臍帶血，大多數人並不陌生，臍帶血對於儲存溫度和儲存環境的要求非常高，只有深低溫凍存狀態下才能使細胞處於休眠狀態，細胞中的酶被抑制，不會發生電離損傷，才可長期凍存。
  • 保衛細胞寶寶離不開細胞培養的四大護法
    大護法：二甲基亞碸（DMSO） 成功凍存和復甦細胞是細胞培養研究的常規操作。細胞低溫儲藏時，防止冰晶形成是維持細胞活力的關鍵。大護法DMSO作為冷凍保護玻璃化劑，可以讓細胞免受冰晶導致的機械損傷。大護法法力無邊，能夠用於原代、繼代培養和重組的異倍體和雜交瘤細胞系、胚胎幹細胞 (ESC) 以及造血幹細胞的凍存。
  • 細胞培養攻略,您值得擁有!
    ATCC動物細胞培養指南 　　各類細胞產品是我們做實驗研究的基礎。一支小小的細胞，從ATCC細胞庫，不遠萬裡來到中國，應該如何正確進行復甦、培養呢？請隨小編為您逐一講解。
  • 實驗新人必讀:細胞培養那些事兒
    具體養細胞時應該摸索細胞喜歡的生長空間密度，既不能讓細胞瓶裡的細胞因擁擠不堪而萎靡不振；也不能讓細胞濃度低於1~5×10^5個/mL而導致「孤獨死」（因為細胞的健康生長需要細胞間的連接）。因而細胞接種前，要先通過細胞計數來調整細胞濃度。3.