質粒DNA提取實驗的?操作步驟

2021-01-11 中國教育裝備採購網

  質粒DNA提取實驗的操作步驟:

  1. 細菌繁殖:LB培養基,2 ml/20ml,37℃,200 rpm,搖一搖,過夜。

  2. 離心10 min,5 000 rpm, 4℃;棄上淸液。

  3. 沉澱(菌體細胞)預冷的TES緩衝液洗滌,離心10 min,5 000 rpm, 4℃,加入預冷的1 ml Solution I,冰浴10 min。

  4. 重新懸浮,加入150 ul溶菌酶母液,室溫放置5 min。

  5. 加入1.2 ml Solution II, 冰浴5 min。

  6. 加入0.9 ml預冷乙酸鉀,混勻,離心10 min,12 000 rpm,4℃。

  7. 加入1.5 ml異丙醇,-20℃冰箱內放置15 min。

  8. 離心10 min,12 000 rpm,4℃。

  9. 取沉澱,懸於400 ul TE緩衝液中。

  10. 加入40 ul,3 M NaAc。

  11. 酚/氯仿,抽提,乙醇沉澱。

  12. 離心10 min,12 000 rpm,4℃。

  13. 取沉澱,冷凍乾燥,再懸浮於50 ul TE緩衝液中。

  14. 電泳檢測提取DNA的質量。

 

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