Cell Death and Disease:外泌體標誌蛋白CD9和CD81受到KLF4的直接調控.

今天為大家帶了一篇6分的文獻。

研究背景：

CD9和CD81經常作為外泌體的表面標記物，在腫瘤進展過程中參與細胞間通訊。KLF4是一種眾所周知的腫瘤抑制因子。本研究旨在探討肝細胞癌(HCC)中KLF4與CD9/CD81的關係。

 

研究內容：

第一步：

為了研究KLF4與CD9/CD81的關係，作者首先過表達KLF4，發現，CD9和CD81表達顯著提高，而敲低KLF4的結果相反（F1A和B）。作者發現，CD9和CD81的啟動子存在可能的KLF4結合位點（F1C），作者使用雙螢光素酶報告基因實驗驗證確實KLF4可以結合在CD9和CD81的啟動子區（F1D），ChIP的結果也驗證了上述結論（F1E和F）。

以上結果表明，KLF4可以結合在CD9和CD81的啟動子區，促進其表達。

 

第二步：

作者使用組織晶片，檢測了正常以及HCC患者組織中CD9和CD81的表達情況，結果表明，在低級別HCC患者中CD9和CD81表達較高，而高級別的患者中表達較低，qPCR的結果證實上述結論，並且作者還發現，KLF4與CD9和CD81的表達呈正相關（F2）。

 

第三步：

在本步，作者在HCC細胞系中分別過表達CD9和CD81。結果表明，過表達之後均可促進細胞增殖和集落形成（F3A-D），動物實驗也證實了上述結論（F3E）。敲低CD9和CD81的結果與以上結果相反（F4）。

 

第四步：

接著，作者探究CD9和CD81影響的信號通路。結果表明，MAPK/JNK信號通路變化最顯著（F5A）。為了驗證這一結果，作者進行了螢光素酶報告基因檢測，以確定CD9/CD81的改變是否會影響活化蛋白1 (AP-1)的轉錄活性，AP-1是JNK通路的下遊轉錄因子，主要由c-JUN和c-Fos家族成員組成。結果表明，AP-1轉錄活性在過表達CD9或CD81時受到抑制，而敲低CD9和CD81則受到增強（F5B和C）。已有證據表明，JNK通路通過調控其下遊基因Cyclin D1、Bcl-2等，促進癌細胞增殖，抑制細胞凋亡。作者對Cyclin D1、Bcl-2進行了檢測，結果表明，過表達CD9或CD81時Cyclin D1、Bcl-2受到抑制，而敲低CD9和CD81則受到增強（F5D和E）。以上結果表明，CD9和CD81可通過MAPK/JNK信號通路影響細胞的凋亡和增殖。

 

第五步：

最後，作者對過表達KLF4之後細胞的外泌體進行了檢測，發現過表達不會對細胞外泌體的量有影響，只是影響外泌體中CD9和CD81的蛋白水平（F6）。

 

研究結論：