石蠟切片HE染色(常規HE染色)的操作步驟

　　石蠟切片(paraffin section) 是組織學常規製片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用於觀察正常細胞組織的形態結構，也是病理學和法醫學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態變化的主要方法，而且也已相當廣泛地用於其他許多學科領域的研究中。教學中，光鏡下觀察切片標本多數是石蠟切片法製備的。活的細胞或組織多為無色透明，各種組織間和細胞內各種結構之間均缺乏反差，在一般光鏡下不易清楚區別出;組織離開機體後很快就會死亡和產生組織腐敗，失去原有正常結構，因此，組織要經固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細胞組織死亡，而能清晰辨認其形態結構。

　　石蠟切片HE染色(常規HE染色)步驟：

　　(1)二甲苯Ⅰ：5～10min;

　　(2)二甲苯Ⅱ：5～10min;

　　(3)無水乙醇Ⅰ：1～3min;

　　(4)無水乙醇Ⅱ：1～3min;

　　(5)95%乙醇Ⅰ：1～3min;

　　(6)95%乙醇Ⅱ：1～3min;

　　(7)80%乙醇：1min;

　　(8)蒸餾水：1min;

　　(9)蘇木精液染色：5～10min;

　　(10)流水洗去蘇木精液：1min;

　　(11)1%鹽酸-乙醇：1～3s;

　　(12)稍水洗：1～2s;

　　(13)返藍(用溫水或1%氨水等)：5～10s;

　　(14)流水衝洗：1～2min;

　　(15)蒸餾水洗：1～2min;

　　(16)0.5%伊紅液染色：1～3min;

　　(17)蒸餾水稍洗：1～2s;

　　(18)80%乙醇：1～2s;

　　(19)95%乙醇Ⅰ：2～3min;

　　(20)95%乙醇Ⅱ：2～3min;

　　(21)無水乙醇Ⅰ：3～5min;

　　(22)無水乙醇Ⅱ：3～5min;

　　(23)石炭酸-二甲苯：3～5min;

　　(24)二甲苯Ⅰ：3～5min;

　　(25)二甲苯Ⅱ：3～5min;

　　(26)二甲苯Ⅲ：3～5min;

　　(27)中性樹膠封固。

　　註：上述(12)和(13)項可省去，但(14)的衝水時間須延長至10～15min(細胞核顯示更清晰);(23)項可用無水乙醇代替，北方地區可省略。

　　說明：石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片製成玻片標本需要數日，但標本可以長期保存使用，為永久性顯微玻片標本。

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