自己總結的MTT方法原理

2020-12-03 生物谷

自己總結的MTT方法原理

來源：丁香園論壇 2007-02-02 14:00

一、  原理
黃色的噻唑蘭，簡稱MTT，可透過細胞膜進入細胞內，活細胞線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性MTT還原為難溶於水的藍紫色的針狀Formazan結晶並沉積在細胞中，結晶物能被二甲基亞碸（DMSO）溶解，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映細胞數量。

二、實驗步驟（實用於貼壁細胞）
1）收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度，分於96孔板，每孔180μl，3000-10000個/孔。
2）置37℃、5%CO2溫箱培養使細胞貼壁，培養6-24小時。
3）加入待篩樣品20μl，繼續培養44小時。
4）小心吸去上清，加入80μl新鮮RPMI 1640培養液，再加入20 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），繼續培養4 h。
6）然後吸掉上清，每孔加入150 ul二甲基亞碸，置搖床上低速振蕩10 min，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490 nm處測量各孔的吸光值。
7）  同時設置調零孔（培養基、MTT、二甲基亞碸），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞碸），每組設定3復孔。
8）  計算抑制率＝[(對照-空白)-(給藥-空白)]/(對照-空白)X100%.

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