一、原理:在催化劑作用下,用濃硫酸破壞試樣中的有機物,使含氮物轉化成硫酸銨。加鹼蒸餾使氨逸出,用硼酸吸收後,在用鹽酸標準滴定溶液滴定,測出氮含量,乘以換算係數6.25,計算出粗蛋白質的含量。
二、操作步驟:
1、試樣的稱量
2、試樣的消煮:向消化管中加0.4g硫酸銅和6g硫酸鈉,12mL濃硫酸,於420℃下在消化爐上消化1.5h。取出冷卻後加入30 mL蒸餾水。
3、氨的蒸餾:將帶消化液的消化管插在蒸餾裝置上,以30 mL硼酸為吸收液,加入2滴混合指示劑,蒸餾裝置的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內,向消化管中加入過量氫氧化鈉溶液進行蒸餾,吸收液為中性時(pH試紙)停止蒸餾。
4、滴定:用0.1 mol/L的鹽酸標準滴定溶液滴定吸收液,溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。同時做空白試驗。
三、關鍵控制點:
1、試劑和溶液
試劑需不含氮,對關鍵試劑需驗收。
指示劑臨用現加,保證加入量一致,顏色一致。
提醒:硫酸、鹽酸屬於第三類易製毒化學品,要合法購買、使用和存放。
2、蒸餾過程
嚴格按照儀器的操作說明進行
儀器的狀態:仔細檢查好,排查各種異常現象
注意蒸餾管的密封
冷凝管要沒入到吸收液面以下
加鹼的量:變黑色,鹼不足或銅不足
時間和體積不是判斷蒸餾是否完全的唯一條件,注意檢查蒸餾液的PH值(廣泛試紙,PH值6-7之間)
3、蒸餾步驟的檢驗
方法:準確稱取硫酸銨0.2g(精確到0.0002g)代替試樣,無需消化,按照常量蒸餾法或半微量蒸餾法進行定量,結果不乘6.25進行計算。
結果:測得硫酸銨的含氮量為:21.19±0.2%
目的:儀器氣密性、加鹼、蒸餾、滴定步驟的檢驗
時機:異常數據、儀器故障、清理管路、定期檢查
提示:硫酸銨的含量經檢測符合要求,也並不意味著粗蛋白質的檢測就一定準確。
4、滴定過程
吸收液應該立即被滴定
標準滴定溶液的放置和保存:鹽酸易揮發應密閉,2個月
滴定管的選擇:25ml,50ml
規範滴定操作:速度、手法、讀數
終點判斷以白色為背景
5、空白測定
方法:準確稱取0.5g蔗糖代替試樣,經消煮、蒸餾、滴定做空白試驗。
目的:消除試劑空白
要求:消耗0.1 mol/L鹽酸標準溶液的體積不得超過0.2mL
消耗0.02mol/L鹽酸標準溶液的體積不得超過0.3mL
問題:空白值不符合要求怎麼辦?
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