編譯：張震東 陳曉晴 魏韜（華南農業大學食品學院）
腺相關病毒（AAV）載體是一種安全、可靠的基因轉移載體，可在體內和體外高效地傳遞基因。最近，美國食品和藥物管理局（FDA）對臨床AAV產品Luxturna和Zolgensma的批准，進一步證明了這一種載體的重要性。
但另一方面，Luxturna和Zolgensma是目前市場上最昂貴的兩種藥物，大規模製造AAV載體的成本是主要因素之一。傳統上，無輔助AAV載體是通過瞬時轉染人胚腎（HEK）293細胞而製成的。雖然該系統便於在實驗室規模上優化AAV載體，但是大規模生產仍具有挑戰性。
因此，基於杆狀病毒的AAV生產系統，因其可擴展性和可預測的生物安全性而備受關注。在這裡，我們將介紹一種簡單的方法來提高基於杆狀病毒的AAV的生產——使用ExpiSf杆狀病毒表達系統和一種化學定義的培養基懸浮培養高密度ExpiSf9細胞。
實驗用相同的杆狀病毒庫比較了F9和ExpisF9細胞的載體產量。在兩個細胞的MOIs處，利用杆狀病毒感染3天後，收集細胞相關的AAV載體，隨後在碘雜醇上進行兩輪超速離心純化，梯度測量通過qPCR獲得的AAV基因組拷貝數，結果表明，與F9細胞相比，ExpisF9細胞在擴增系統中產生的AAV載體產量顯著增加了7到19倍（圖A）。
另一方面，杆狀病毒感染的ExpiSf9細胞每1ml懸浮培養可產生51011個高純度AAV載體的基因組拷貝，比我們從傳統的Sf9細胞系統獲得的滴度高出19倍。而當小鼠被給予相同劑量的AAV載體時，我們發現ExpiSf9細胞和Sf9細胞中的載體具有相似的轉導效率和生物分布。因此，ExpiSf杆狀病毒表達系統將會支持更加方便並且可擴展的AAV製造，適合臨床前和臨床的應用。
針對可擴展性和生物安全性的問題，我們在這裡還將介紹——使用已被用於在昆蟲細胞中產生各種重組蛋白的杆狀病毒表達系統，包括臨床級產品，如Cervarix和弗勞布洛克。該系統作為大規模AAV載體生產站臺，在臨床上具有很高的吸引力，它具有以下優勢：第一用攜帶AAV載體基因組和AAV Cap和Rep蛋白的杆狀病毒載體感染昆蟲細胞，可以獲得無轉染的AAV載體；第二，在無血清培養基中懸浮生長，可以獲得更高的細胞密度；第三，Sf9細胞不支持潛在汙染的人類因子的複製；最後，杆狀病毒不能在人體內複製。而同時，作為這些特性，也提高了Sf9衍生AAV載體在臨床前和臨床應用中的生物安全性。事實上，這種基於昆蟲細胞的表達系統，已被用於AAV基因治療藥物Glybera（該藥物於2012年獲得歐洲藥物管理局（EMA）的批准）
論文連結：
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33145369/
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