三種實時螢光RT-PCR試劑在檢測甲型H1N1流感病毒中的應用

2021-01-10 中國質量新聞網

    黃宗炎 朱玉蘭 劉勝牙 王佃鵬1 高朝賢 董瑞玲 黃彤文 李政良 胡孔新

    （1.深圳國際旅行衛生保健中心，深圳 518033；2.中國檢驗檢疫科學研究院，北京100123）

    摘要 〔目的〕結合WHO公布的甲型H1N1流感病毒的檢測引物和探針，探索合適的實時螢光RT-PCR試劑應用於國境口岸甲型H1N1流感病毒疑似標本的檢測。〔方法〕通過對連續梯度稀釋陽性對照品進行檢測，從而分析AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara OneStep PrimeScript 3種常用實時螢光RT-PCR試劑的靈敏度、信號強度、反應效率等因素。〔結果〕3種試劑的檢測下限均為1:1000倍稀釋陽性對照品；AB AgPath-ID、Qiagen QuantiTect和Takara OneStep PrimeScript檢測的線性斜率分別為-5.517、5.214和-4.600；信號強度上QiagenQuantiTect相對於其他2種明顯偏弱。〔結論〕 為國境口岸輸入性甲型H1N1流感病例的檢測和監控提供了有力的技術保障。

    關鍵詞 實時螢光RT-PCR；甲型H1N1流感病毒；靈敏度；斜率；閾值循環

    〔中圖分類號〕　R511.7　〔文獻標識碼〕　B

    Application of  three Kinds of RT-PCRKit for Detection of Influenza A（H1N1） Viruses   HuangZongyan1, Zhu Yulan1, Liu Shengya1, Wang Dianpeng1, Gao Chaoxian1,Dong Ruiling1, Huang Tongwen1, Li Zhengliang1, Hu Kongxin2.(1.Shenzhen International Travel Health Care Center, Shenzhen518033, China; 2.Chinese Academy of Inspection and Quarantine,Beijing 100025, China)

    [Abstract]   Objective  To set up a fast and effective real time RT-PCR recipe to detectinfluenza A（H1N1）viruses emergent at frontier ports by comparingand assessing the effects of different types of real time RT-PCRkit combined with the probes and primers published by WHO.Method  Comparing and valuating the sensitivity, signalstrength and efficiency with other aspects in influenzaA（H1N1）viruses detection using three different brands of real timeRT-PCR kit named AgPath-ID, QuantiTect and One Step PrimeScriptrespectively by the method of continuous gradient dilution ofpositive influenza A（H1N1）virus RNA sample. Result The three kindsof kit had the same sensitivity at the lowest diluted positive RNAsample by 1:1000 fold; The Slope for AgPath-ID, QuantiTect and OneStep PrimeScript was -5.517，-5.214 and -4.600 respectively. As forSignal Strength, QuantiTect was much poorer than the other two.Conclusion  AgPath-ID, QuantiTect and One Step PrimeScriptcould all be used for detection of influenza A（H1N1）viruses. TheResult of numerous samples detection based on One Step PrimeScriptcombined with three panels of primers and probes WHO recommendedshowed such real time RT-PCR recipe should allow us to reactquickly and effectively during influenza A（H1N1）outbreaks atfrontier ports.

    [Key words]   Real timeRT-PCR；Influenza A（H1N1）virus；Sensitivity；Slope；Ct

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