周周講第二十一期:Co-IP與GST Pull-down的區別在哪裡?

2021-01-14 生物競賽菁英聯盟
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學習生競的同學可能都知道，用於研究蛋白質與蛋白質之間相互作用的技術有很多，比較有代表性的就是Co-IP與GST Pull-down技術，在周周講第十九期文章中我們也提到過，2018年聯賽中出現了免疫共沉澱Co-IP技術7道連選題。那麼Co-IP與GST Pull-down技術二者的區別和聯繫在哪裡？


Co-IP與GSTPull-down，本質上都是親和層析。Co-IP技術的原理是，用一個小磁珠，上面偶聯著A/G蛋白，該蛋白可以與抗體的恆定區結合。在Co-IP的結果圖中，我們經常可以看到IP：M這樣的字樣。IP：M代表著，體系中加入了M蛋白的抗體。則一個拉一個，小磁珠上會結合有A/G蛋白-M蛋白的抗體-M蛋白。若M蛋白與N蛋白有互作，則N蛋白也會在小磁珠上，最終被檢測到。而如果M蛋白與N蛋白沒有互作，則N蛋白不會出現於小磁珠，最終無法檢測到N蛋白。而對於GST Pull-down，假設要研究M蛋白能否與N蛋白互作，該方法需先將M蛋白與穀胱甘肽巰基轉移酶GST構建成融合蛋白，之後在穀胱甘肽親和層析柱中上樣，令M蛋白結合於層析柱。再將N蛋白過柱子，若層析柱最終結合有N蛋白，則代表M蛋白與N蛋白可互作。下期預告：在下一期將為大家分享關於生物聯賽考點相關的話題，18年聯賽考察Co-IP，19年聯賽考察EMSA。請同學們課前先思考：到了2020年，是不是有可能考察探究RNA與蛋白質之間相互作用的技術呢？


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