組培培養基不凝固?瓊脂用量和pH值對了嗎?

2020-12-03 百度經驗

本文研究pH和瓊脂濃度對培養基凝固程度的影響，以確定組織培養技術中合理的瓊脂濃度。

實驗設計的pH有：2.0、4.0、5.0、5.8、6.2、8.0，瓊脂濃度：2.5、3.0、3.5、4.0、6.0、8.0g/L，共36個處理組合。每個處理重複3次。

準確量取各母液並用蒸餾水定容到150mL容量瓶中，然後倒入500mL燒杯中，加入所需要的瓊脂，並在電爐上加熱，使瓊脂全部溶解後，降溫至50℃時調節pH，然後分別將150mL培養液分裝到3個150mL三角瓶中，置於121℃高壓滅菌鍋內25分鐘，室溫下自然凝固後觀察。

1. pH為2.0時，2.5-8.0g/L瓊脂濃度的培養基凝固等級均為0級；pH為4.0-8.0時，各濃度的培養基凝固等級在一定的瓊脂濃度內隨濃度增加而增高。在相同瓊脂濃度下，凝固等級隨pH增加而提高，其中當pH5.0-8.0時，同一濃度下的凝固等級基本相同(表1)。

說明pH和瓊脂濃度共同影響培養基的凝固等級，pH較低(≤4.0)時，pH是影響凝固等級的主要因素，pH較高(5.0-8.0)時，瓊脂濃度是影響凝固等級的主要因素。

培養以沙芥莖尖誘導形成的愈傷組織、大蒜和馬鈴薯芽的結果顯示，在pH5.5-6.2範圍內，瓊脂濃度為3.0-3.5g/L的B5、1/2B5、MS培養基上，其外植體均生長正常，並未因培養基種類而影響凝固等級(表2)。

據此認為，用凝固等級為2級、3級的培養基即可滿足大多數外植體的正常支撐需求。對要求pH為5.0-6.2的植物來說，無論以何種外植體和培養基培養，均可用3.0-4.0g/L的瓊脂；要求pH為4.0-5.0的植物可適當提高瓊脂濃度。

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