Western blot實驗的若干細節,總有一條幫到你.

2021-03-01 聊點學術

▍Western blot不是玄學，只要積極總結經驗和及時改進實驗條件，每個人都能做出漂亮的條帶。下面推薦幾條個人經驗，可能對大家有所幫助。▍

 經驗一

每個學習Western blot實驗的新手，基本都是從先跟著師兄師姐照貓畫虎。如果你的目標蛋白比較常規且實驗室既往經驗不錯，新手也能跟著做出條帶。

但我想強調的是抱大腿只是第一步。搞清楚原理，然後遇到問題，能自我分析並解決問題才是可持續發展的道路。

【推薦】全程剖析Western blot原理，你才能掌控它。

 經驗二

搞清楚原理後，搭配避雷手冊，效果更佳，這篇文章從實驗操作的細節上，結合原理對問題進行了分析，旨在保證自己能夠得到蛋白條帶。

【推薦】血淚教訓，Western blot最全避雷手冊。

另外兩篇文章主要是從條帶的角度進行探討，旨在優化條帶。下面的文章基本上囊括了絕大部分可能遇到的問題。

【推薦】好傢夥，蛋白條帶也玩出抖音效果了.

【推薦】新玩法！用軟體快速評估蛋白條帶曝光程度？

 經驗三

得到蛋白條帶，分析條帶也很重要。分析軟體有很多，主流還是使用image J。下面這篇文章是一個圖文教程，操作過程已驗證，得到的數據發表文章是沒有問題的。建議收藏和實操一下。【推薦】Image J分析Western Blot蛋白條帶灰度值

 經驗四

再好的實驗結果也需好好組圖，以達到直觀、美觀的效果。為了保證組圖效果，我一般推薦大家使用Adobe illustrator，比PPT要方便很多，同時也能保證導出的圖像清晰度和尺寸。

具體操作過程在下方的文章中。當然，這也是一篇圖文教程，建議收藏和實操一下。

【推薦】聊一聊Adobe Illustrator組圖過程。

【推薦】如何達到盤龍小學畢業水平之Western Blot組圖動作分解。

 經驗五

按時吃飯！

Western blot實驗耗時比較長。為了趕時間，大家往往會穿插其它實驗或者同時做2輪Western blot。一旦這樣安排，一天時間基本上排滿了。

但是不論如何，一定要按時吃飯。實驗失敗了可以再做，但身體是自己的。要走可持續發展道路，這是最重要的一條經驗。

Ending

如果您覺得有用，點個贊或在看或轉發。

轉載文章，需附二維碼和出處！

聊點學術，掃碼關注

相關焦點

  • western blot 實驗從技術角度,教你如何辨別成像儀
    我們都知道，目前western blot 實驗是研究蛋白質中最常見、最經典的一種實驗技術，可與眾多實驗技術搭配，為蛋白質研究保駕護航。但其耗時長、步驟多、變量雜，而我們在結果成像中，最關心的點有哪些呢？這些我們最關心的點，又體現在成像儀的哪些方面呢？
  • Western blot實驗室實操+原理
    WB流程圖western blot即免疫印跡試驗是一個非常非常重要的實驗技能
  • Westernblot實驗步驟及注意事項
    Westernblot 實驗步驟 1. 組織塊稱重 2. 利用液氮、研缽粉碎組織塊 3.Westernblot 試劑盒顯色 15. 分析比較記錄 western blot的實驗步驟及注意事項的資料 1. 把聚丙烯醯胺凝膠中的蛋白質電泳轉移到硝酸纖維膜上。 1）轉移緩衝液洗滌凝膠和硝酸纖維素膜，將硝酸纖維素膜鋪在凝膠上，用5ml移液管在凝膠上來回滾動去除所有的氣泡。
  • western blot 過程詳解
    4.封閉（Blocking）【western洗滌液】【封閉液用什麼，多大濃度？】轉膜完畢後，立即把蛋白膜放置到預先準備好的Western洗滌液中，漂洗1-2分鐘，以洗去膜上的轉膜液。從轉膜完畢後所有的步驟，一定要注意膜的保溼，避免膜的乾燥，否則極易產生較高的背景。用微型臺式真空泵吸盡洗滌液，加入Western封閉液，在搖床上緩慢搖動,室溫封閉60分鐘。
  • Western Blot (免疫印記法)常識問答
    什麼是western blot?　　答：WB又稱免疫印記法.是將生物大分子物質通過不同途徑轉移到固相載體的過程。　　2. western blot 有什麼優點?　　答：靈敏，可達ng級，用Ecl顯色法理論上可達pg 級。方便，特異性高。　　3. western blot 的具體步驟是什麼?　　答：一.
  • 獻給初學者:western blot 操作步驟詳解(上)
    ，說法各異，於是綜合了目前網上所能找到的資料和個人實際經驗，編輯了這份 western blot 操作步驟，內容包括主要操作步驟和所需要注意的有用的細節，並附上參考文獻。我按下文的步驟操作已經做出來了穩定可重複的、背景乾淨的 western 條帶了，所以相信你也行。為了節省時間，我總結了一下 western blot Quick Guide和一天做出 western 的具體時間規劃，附在文末，要在下一次展示。
  • 淺談Western blot
    Western blot（蛋白印跡）是科研研究中最為平常的實驗，但卻蘊含了很多知識。儘管我們在接觸該實驗時都會被虐的體無完膚，但卻秉承著「WB虐我千百遍，我卻待它如初戀」的精神一直和WB鬥智鬥勇。現在就把各位前輩做WB的各種經驗總結起來，希望對大家能有所幫助。
  • 初學者的western blot操作步驟大全
    Western Blot 第1階段：樣品製備Novus Biologicals Visual Protocols: In phase 1 of the western blot procedure, you will learn how to prepare
  • 獻給初學者:western blot 操作步驟詳解
    ，編輯了這份 western blot 操作步驟，內容包括主要操作步驟和所需要注意的有用的細節，並附上參考文獻。網上有人喜歡等質量上樣（即每個泳道的上樣體積不一但質量一定），也有使用等體積上樣（即先把各個樣品稀釋到某一固定濃度，然後等體積等質量上樣，計算上樣體積時需包含 loading buffer 的體積）。按分子克隆的說法，還是使用等體積上樣比較好。上樣總體積一般不超過 15 ul，加樣孔的最大限度可加 20 ul 樣品。
  • Western blot 實驗步驟
    Westernblot 的實驗基本原理：本實驗是對蛋白進行定性和半定量分析
  • Western Blot詳解-常見的問題指南(一)
    C.細胞水平要做western blot，多少細胞提的蛋白夠做western blot？  解答：一般5×10^6就足夠了D.同一樣品能同時提RNA又提蛋白麼？這樣對western blot有無影響？  解答：能，沒有問題，我們做過。
  • Western blot竅門分享
    做了兩年半的Western blot，真的是遇到了太多不可思議的、解決不了的問題，猶記得剛進實驗室的時候，學會了WB像是學會了全世界，殊不知這只是科研實驗的一塊小磚頭，如今快要畢業了，還在每天跑著WB補實驗。今天在這裡跟大家分享一些做WB的小竅門，不一定有科學原理支撐，但卻能讓你節省時間，跑出完好看的條帶。
  • 獻給初學者:western blot 操作步驟詳解(下)
    轉完後立即清洗設備，特別是金屬上蓋，轉膜液特別容易在金屬上蓋上形成結痂，影響設備的正常使用，我們實驗室今年做 western 的同志因為忽略這一點，轉膜儀燒壞了好幾次。依據分子量大小電泳 15~60 min。如果初次轉膜，可以根據一般經驗，即多少 kD 的蛋白就轉多少分鐘，再根據結果調整時間。之後斷開電源，取出轉移膜進行後繼實驗。
  • Western-blot整個實驗過程中的原理全在這裡
    Western blot可謂是我們基礎研究中必備的技能之一，或許你對於其中的步驟瞭然於胸，但這些原理，你知道嗎？？？蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。
  • Western blot 最全視頻教程,你值得擁有
    Western blot 的地位其實比較尷尬，在分子生物學實驗有它，在分子克隆中也有它，蛋白表達和組學研究中也會提到它，雖然哪裡都少不了它，但國內卻沒有專門一本著作來討論這個問題
  • Western Blot(WB)蛋白免疫印跡基本原理及FAQ | RIP專題
    SDS-PAGE 可對蛋白質樣品進行分離，轉移到固相載體——例如硝酸纖維素薄膜（NC）上。固相載體可以吸附蛋白質，並保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。轉移後的 NC 膜就稱為一個印跡（blot），用蛋白溶液（如 5%BSA 或脫脂奶粉溶液）處理，封閉 NC 膜上的疏水結合位點。
  • Western Blot 之組織蛋白裂解及測定操作步驟
    作者：螺絲釘Fiona解螺旋出品，轉載需經授權　　大家在做動物實驗的時候經常會需要利用大鼠組織進行Western Blot檢測目的蛋白或者相關蛋白表達量差異情況，今天我就以腦組織為例說說這組織蛋白裂解及測定的具體操作步驟，都是師兄師姐的吐血總結，大家可以參考一下！
  • Western Blot詳解-原理
    Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然後利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用於檢測蛋白水平的表達。
  • Western blot 操作步驟[完整版]
    Western blot 操作流程作者：孫雪純審核人：關寶生發布者：王建宇實驗原理：    Western,也稱Western blot1.內參可檢測整個WB實驗過程及體系是否正常工作,如果一個實驗連內參照都出不了陽性結果的話（在內參抗體有效的情況下）,那麼這個體系就是存在問題的；2、起半定量的標準的作用,內參一般選擇管家基因編碼表達的蛋白,在很多組織和細胞中都是穩定表達的,因此可以作為檢測靶蛋白表達量的標準；內參名稱分子量大小
  • 老司機帶你玩轉分子生物學 (初級)
    大家是不是，對於分子生物學實驗和實驗的所涉及的原理還沒有一個真真切切的認識。當老師講這門課的時候，你想的就是考試拿學分了，最後導致實驗不停地出問題卻不知道哪一步錯了。當然對於分子生物學的不理解也導致一些人國自然寫不出來，或者抄別人的標書都會抄錯。當然對於分子生物學的不理解，也導致一些人每天念念叨叨精準醫療卻看不懂一張基因檢測報告。