Western blot 詳細操作步驟

2021-01-20 愛科研愛挑戰

2）蛋白質從SDS聚丙烯醯胺凝膠轉移至固相支持體

目前進行的Western印跡反應大多還是從凝膠上直接把蛋白質電轉移至硝酸纖維素濾膜之上。把凝膠的一面與硝酸纖維素濾膜相接觸，然後將凝膠及與之相貼的濾膜夾於濾紙、兩張多孔墊料以及兩塊塑料板之間。把整個結合體浸泡於配備有標準鉑電極並裝有pH8.3的Tris-甘氨酸緩衝液的電泳槽中，使硝酸纖維素濾膜靠近陽極一側，然後接通電流約0.5小時。在此期間，蛋白質從凝膠中向陽極遷移而結合下硝酸纖維素濾膜上。為了防止過熱並因而導致在夾層中形成氣飽，轉移過程應在冷室中進行。

3）對固定於硝酸纖維素濾膜上的蛋白質進行染色

可供對固定於硝酸纖維素濾膜上的蛋白質進行染色的方法有多種，但僅有麗春紅S染色法可與所有免疫學檢測方法兼容，這是因為該染料只會短暫顯色而且在進行Western印跡時可被洗去。


四）封閉硝酸纖維紊濾膜的免疫球蛋白結合位點

正如從SDS聚丙烯醯胺凝膠轉移出來的蛋白質可以與硝酸纖維素濾膜結合一樣，免疫學檢測試劑中的蛋向質同樣也能與之結合。

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    ，編輯了這份 western blot 操作步驟，內容包括主要操作步驟和所需要注意的有用的細節，並附上參考文獻。最開始做印跡的是一個叫 Southern 的科學家，但印跡的對象是 DNA 鏈，他把這種技術稱為  Southern blot，後來出現了兩個過程相似，但是對象不同的印跡方法，一個針對RNA，一個對蛋白質，人們分別把這兩種技術的稱為 Northern 和 Western，與這兩個技術的發明人沒有關係了。由於這一步方法各異，具體步驟請參考試劑盒的說明書即可。
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