細胞增殖檢測:H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法

2021-01-18 中國教育裝備採購網

　　一、實驗原理：

　　T細胞、B細胞表面具有識別抗原的受體和有絲分裂原受體，在特異性抗原刺激下可使相應淋巴細胞克隆發生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)、抗CD2和抗CD3McAb 作為多克隆刺激劑可選擇性地刺激T細胞增殖;上海創賽科技提供刀豆蛋白A IV，ConA Type IV，11028-71-0，商品編號：B11000088-25mg，價格118.3元。

　　而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌體(SAC)、脂多糖(LPS，對小鼠有作用)則刺激B細胞發生增殖;腫瘤刺激劑PMA對T、B細胞的增殖有刺激作用。最近發現，integrin家族中VLA組中某些受體與相應配體結合後也能活化T細胞。根據形態學或氚標記胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)摻入率測定T細胞的增殖水平。上海創賽科技提供脂多糖，LPS (Lipopolysaccharides)，商品編號：B11000282-10mg，價格269.5元。

　　二、材料及試劑

　　1、培養基：RPMI-1640或TC199培養液

　　2、PHA;同形態學方法

　　3、小牛血清;上海創賽科技提供標準小牛血清 ，商品編號：C21-1511-100ml，價格135元。

　　4、3H-TdR;選用比活性為2Mci~10Mci/mg分子的製品，將1Mci/ml溶液以生理鹽水稀釋成100uci/ml，於4℃保存備用。臨用時再用培養液稀釋成10uci/ml溶液。

　　5、3%冰醋酸

　　6、濃甲醛

　　7、30%H2O2液

　　8、閃爍液：以下試劑混合即可。

　　PPO(2，5二苯基噁唑); 5.00g

　　POPOP[1，4-雙(5-苯基噁唑基-2苯; 0.30g

　　無水乙醇; 200.00ml

　　甲苯; 800.00ml

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