中文摘要：
目的：
建立並優化適用於龜裂鏈黴菌（Streptomycesrimosus）M527 的屬間接合轉移體系，並在此基礎上分析四個啟動子的表達活性。
創新點：
有效的遺傳轉化系統和合適的啟動子是鏈黴菌基因表達和基因工程的必要前提。由於鏈黴菌的遺傳背景複雜，接合轉移實驗參數對菌種具有高度特異性。因此，本研究建立並優化了一套適用於 S. rimosus M527 的屬間接合轉移體系，並在此基礎上分析比較了四個啟動子的表達活性。這將為進一步遺傳修飾 S. rimosus M527 奠定基礎。
方法：
以 S. rimosus M527 為研究對象，通過對接合轉移體系中的一些重要的實驗參數（如接合轉移培養基、供受體比例、熱激溫度和混合培養時長等）進行了優化。在此基礎上，構建以gusA 為報告基因的質粒，通過直觀顯色反應以及 GUS 酶活的定量檢測，分析比較了四個啟動子的表達活性。
結論：
建立了一種有效的適用於 S. rimosus M527 接合轉移體系，優化後的接合效率最高達3.05×10−5。分析測試的四個啟動子中，合成啟動子 SPL-21 表現出最高表達活性，比常用強組成型啟動子permE*活性高出2.2 倍，合成啟動子 SPL-57 與 permE* 的活性無顯著差異，內源啟動子potrB 的活性比permE*降低了50%。
關鍵詞：
龜裂鏈黴菌 M527；接合轉移；啟動子；GUS
Zhang-Qing Song, Zhi-Jun Liao, Ye-Feng Hu, Zheng Ma, Andreas Bechthold, Xiao-Ping Yu本文引用格式：
Zhang-qing SONG, Zhi-jun LIAO, Ye-feng HU, Zheng MA, Andreas BECHTHOLD, Xiao-ping YU, 2019. Development and optimization of an intergeneric conjugation system and analysis of promoter activity in Streptomyces rimosus M527. Journal of Zhejiang University-Science B (Biomedicine & Biotechnology), 20(11):891-900.
https://doi.org/10.1631/jzus.B1900270
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