細胞被支原體汙染的危害有多大

2020-10-30 締一0601

在細胞培養過程中，支原體感染發生率達到63%，因而細胞培養過程中被支原體汙染是一個世界性的難題。當細胞（特別是傳代細胞）被支原體汙染後，細胞內的DNA、RNA及蛋白表達發生改變，而細胞的生長率一般並未發生顯著的影響，因而細胞被支原體汙染一般難以察覺。


支原體汙染普遍存在，據美國數據統計，細胞發生支原體汙染的機率在70%以上。同時，由於支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到，不易被實驗者肉眼發覺，支原體汙染逐漸成為一個普遍存在的問題。本文締一生物為您分析細胞培養：關於支原體汙染的危害。

支原體汙染的危害

支原體汙染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，支原體汙染有多煩人，相信實驗人都領教過了。

1、細胞狀態不佳，生長速度慢，實驗無法推進。

2、細胞內DNA、RNA及蛋白表達發生改變，影響實驗結果，導致實驗數據不準確，時間、經費的浪費。

<!--[if !supportLists]-->3、<!--[endif]-->一株汙染的細胞成為實驗室的汙染源，對工作區域以及培養箱和液氮罐造成汙染，進而汙染其他細胞，導致其他細胞繼發性汙染，實驗受影響，數據無法重複，預期結果出不來。

實驗者可選用對支原體特效的抑制劑，通過對細胞的前期處理，中期加藥，逐步通過4代左右的培養，從而將支原體汙染徹底清除，確保試驗順利推進，結果準確。全世界此類試劑眾多，北京締一生物周圍的實驗人做過很多嘗試，其中效果最確切且性價比很高的當屬德國Minerva公司的ZellShield®支原體祛除劑。

預防及處理

組織細胞培養工作中，可以從以下幾方面來預防支原體的汙染：

控制環境汙染；嚴格實驗操作；細胞培養基和器材要保證無菌；在細胞培養基中加入適量的抗生素。

當細胞被支原體汙染後若由於材料的特殊性必須保留可以採用一定的抗生素進行處理，對支原體最有抑制活性抗生素是四環素類、大環內酯類等。目前，市場上已有了新一代支原體抗生素M-Plasmocin，能有效的殺滅支原體，又不影響細胞本身的代謝，而且處理過的細胞不會重新感染支原體。另外，配合支原體檢測試劑盒可以幫助儘快發現支原體的汙染。

後果

細胞株若受到細菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之汙染時，會嚴重的影響實驗的結果。而細菌、真菌等之微生物汙染時，較易自培養基等的外觀變化察覺。但是若受到支原體之汙染時，細胞之外觀較無明顯變化，但是其汙染會造成細胞之生長速率緩慢、細胞產生病變之型態改變等等變化。

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    概述：在細胞培養過程中，支原體感染發生率達到63%，因而細胞培養過程中被支原體汙染是一個世界性的難題。細胞培養中常遇見的有細菌汙染、真菌汙染、支原體汙染、病毒汙染等。說起支原體汙染，估計細胞培養的同學就開始犯愁了，細胞培養的老手都知道，支原體汙染非常不易察覺。
  • 細胞培養中的支原體汙染問題
    支原體無細胞壁形態呈高度多形性．可為圓形、絲狀或梨形。支原體形態多變，在光境下不易看清部結構。電鏡下觀察支原體膜為三層結構．其中央有電幹密度大的密集顆粒群或絲狀的中心束。支原體多吸附或散在於細胞表面和細胞之間。橫斷面與細胞微絨毛相似，但微絨毛電子密度比支原體小，且中央無顆粒群或中央束。
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    國外調查證明，大約有二十多種支原體能汙染細胞，有的細胞株可以同時汙染兩種以上的支原體。 支原體汙染的來源包括工作環境的汙染、操作者本身的汙染（某些支原體在人體是正常菌群）、培養基的汙染、被汙染細胞造成的交叉汙染、實驗器材的汙染、製備細胞的原始組織或器官的汙染，等等。
  • Nature:大量的細胞研究被支原體汙染摧毀
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  • 細胞培養的實驗室對支原體汙染預防有幾種預防
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  • 細胞被支原體汙染是每個實驗室常見但不自知的事
    在細胞培養過程中，支原體感染發生率達到63%，（63%，多恐怖）因而細胞培養過程中被支原體汙染是一個世界性的難題。當細胞（特別是傳代細胞）被支原體汙染後，細胞內的DNA、RNA及蛋白表達發生改變，而細胞的生長率一般並未發生顯著的影響，因而細胞被支原體汙染一般難以察覺。 　　首先，什麼是支原體呢？
  • 哪些情況下細胞會被支原體汙染,紫外照射不一定能殺滅支原體
    細胞株若受到細菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之汙染時，會嚴重的影響實驗的結果。本文威正翔禹/締一生物為您分析細胞支原體汙染之一般情況。但是若受到支原體之汙染時，細胞之外觀較無明顯變化，但是其汙染會造成細胞之生長速率緩慢、細胞產生病變之型態改變等等變化。
  • 支原體汙染的影響是什麼?如何應對呢?
    細胞培養過程中，由於實驗環境、操作者鼻腔口腔、實驗器材等很多地方都有支原體的存在。因此，細胞發生支原體汙染的頻率很高。據美國數據統計，細胞發生支原體汙染的機率在70%以上。同時，由於支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到。因此，支原體汙染不易被實驗者肉眼發覺。而支原體汙染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。
  • 分享：一種在細胞培養中支原體汙染檢測的方法
    支原體汙染是細胞培養實驗中的常見問題之一，那如果細胞被支原體汙染不明顯，出現實驗結果難以理解，重複性差等問題如何解決呢，本文締一生物為您分享：一種在細胞培養中支原體汙染檢測的方法。分享：一種在細胞培養中支原體汙染檢測的方法常規PCR
  • 細胞總培養不好，你考慮過是支原體在作亂嗎
    導致細胞生長緩慢的常見原因：細胞生長緩慢；細胞變形；碎片增加；懸浮細胞容易成團；培養基提前變色；鏡下發現有小黑點；如果排除了其他試劑選擇不當、細胞株老化、細菌汙染……原因，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示：細胞可能出現了支原體汙染。
  • 不可小看支原體汙染問題
    在培養細胞時，人們常常關注細菌和真菌的汙染，認為它們是細胞培養的主要幹擾因素。但其實，更嚴重的是支原體 的感染，它的發生率非常高，而且不易被發現。不僅普通光鏡下無法發現支原體，而且培養基也不容易變色。只有在汙染的後期培養基才容易變黃。下圖為支原體嚴重汙染後的表現：那麼，支原體汙染為什麼發生率這麼高？
  • 檢測細胞培養及生物製品的支原體汙染選用什麼呢
    支原體檢測試劑盒Venor®GeM OneStep採用常規PCR方法，並包含PCR需要的所有試劑。其中引物和dNTP、DNA聚合酶、內控對照都包含在PCR預混液（Mix）乾粉中。重懸緩衝液復溶Mix乾粉，分裝到PCR管中，分別加入細胞上清（陰性對照）、復溶的陽性對照DNA和待測樣品（細胞上清或提取的樣本DNA），進行PCR反應。