支原體是一類無細胞壁、大小介於細菌和病毒之間(直徑在0.13~0.18 μm)並獨立生活的微生物,可穿過0.22 μm 的孔徑濾膜,光鏡下難以看清它的形態結構,並對青黴素有抗藥性,是細胞培養界的隱性殺手。
主要來源是血清,支原體汙染不能用肉眼或光學顯微鏡檢查細胞觀察出來,帶有一定的隱蔽性,易被人們忽視。當細胞被支原體汙染後,在光鏡下常可見到細胞核及胞漿內出現大小不等的顆粒或空泡,細胞營養液可能毫無變化,短期內細胞沒有明顯的病理變化,也可以因為傳代或換液而緩解。只有當汙染嚴重時才影響細胞增殖,使細胞脫落。支原體可以與宿主細胞形成一個共生關係,使汙染不斷擴大。一旦發生支原體汙染,支原體可以通過移液、傾倒液體時產生具有潛在感染力的飛沫和吸附的塵埃,沉積在物體表面。這種汙染性塵埃能存活數天甚至數周,使操作環境受到汙染,若不及時處理還會產生交叉汙染或再次汙染。
檢測:常用的檢查方法為培養檢測法,即取1mL細胞培養液加入支原體液體培養基中,培養5天後,觀察培養基的顏色變化。如果變黃則懷疑該細胞受到支原體汙染。如果不變色,則盲傳一代。若顏色變黃,可接支原體固體培養基,於5%CO2培養箱中培養3~5天,觀察有無「煎蛋」狀支原體菌落。一旦發生汙染即淘汰該細胞和培養液。此外,支原體汙染還可用螢光染色法和相差顯微鏡觀察法等檢測方法,或者直接購買支原體檢測試劑盒進行檢測。
支原體汙染細胞後,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有:抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯合處理。要注意的是:支原體沒有細胞壁,故作用於細胞壁生物合成的抗生素,如內醯胺類、萬古黴素等是不敏感的;對多粘菌素、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性抗生素是四環素類、大環內酯類等,氨基糖苷類、氯黴素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養用物,通常濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的。--
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