細胞培養支原體汙染的判斷和處理方法

2021-01-21 LAB-BIOGEN倍捷科技

支原體是一類無細胞壁、大小介於細菌和病毒之間(直徑在0.13~0.18 μm)並獨立生活的微生物,可穿過0.22 μm 的孔徑濾膜,光鏡下難以看清它的形態結構,並對青黴素有抗藥性,是細胞培養界的隱性殺手。

主要來源是血清,支原體汙染不能用肉眼或光學顯微鏡檢查細胞觀察出來,帶有一定的隱蔽性,易被人們忽視。當細胞被支原體汙染後,在光鏡下常可見到細胞核及胞漿內出現大小不等的顆粒或空泡,細胞營養液可能毫無變化,短期內細胞沒有明顯的病理變化,也可以因為傳代或換液而緩解。只有當汙染嚴重時才影響細胞增殖,使細胞脫落。支原體可以與宿主細胞形成一個共生關係,使汙染不斷擴大。一旦發生支原體汙染,支原體可以通過移液、傾倒液體時產生具有潛在感染力的飛沫和吸附的塵埃,沉積在物體表面。這種汙染性塵埃能存活數天甚至數周,使操作環境受到汙染,若不及時處理還會產生交叉汙染或再次汙染。

檢測:常用的檢查方法為培養檢測法,即取1mL細胞培養液加入支原體液體培養基中,培養5天後,觀察培養基的顏色變化。如果變黃則懷疑該細胞受到支原體汙染。如果不變色,則盲傳一代。若顏色變黃,可接支原體固體培養基,於5%CO2培養箱中培養3~5天,觀察有無「煎蛋」狀支原體菌落。一旦發生汙染即淘汰該細胞和培養液。此外,支原體汙染還可用螢光染色法和相差顯微鏡觀察法等檢測方法,或者直接購買支原體檢測試劑盒進行檢測。

支原體汙染細胞後,特別是重要的細胞株,有必要清除支原體,常用方法有:抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯合處理。要注意的是:支原體沒有細胞壁,故作用於細胞壁生物合成的抗生素,如內醯胺類、萬古黴素等是不敏感的;對多粘菌素、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對支原體最有抑制活性抗生素是四環素類、大環內酯類等,氨基糖苷類、氯黴素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養用物,通常濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的。


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    支原體檢測試劑盒Venor®GeM OneStep採用常規PCR方法,並包含PCR需要的所有試劑。其中引物和dNTP、DNA聚合酶、內控對照都包含在PCR預混液(Mix)乾粉中。重懸緩衝液復溶Mix乾粉,分裝到PCR管中,分別加入細胞上清(陰性對照)、復溶的陽性對照DNA和待測樣品(細胞上清或提取的樣本DNA),進行PCR反應。
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  • 細胞汙染的處理方法
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  • 細胞被支原體汙染的危害有多大
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  • 如何有效把支原體汙染趕出你的細胞?
    對於已耗費很多時間、大量擴增起來的細胞,或經過基因轉染、體外刺激等大量工作處理過的細胞,如果發現細胞被支原體汙染了,怎麼辦?本文締一生物為您分析如何有效把支原體汙染趕出你的細胞? 由於前期工作量巨大,我們無法丟棄已有細胞。
  • 方法:珍貴細胞株被支原體汙染怎麼祛除?
    非常珍貴的細胞或不易獲得的生物樣本,被支原體汙染了,但需要挽救,不能丟棄, 例如:珍稀的細胞種子。可採用支原體徹底清除法。本文締一生物為您分析珍貴細胞株被支原體汙染怎麼祛除?若是可以培養超過一個月的細胞,則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold,直接殺除+鞏固防護兩步處理。若是無法長期培養的珍貴樣本或病毒收貨液,則推薦使用德國MB公司的Mynox® ,處理3小時,直接殺除。
  • 細胞中支原體的汙染檢測有如下幾種方法
    支原體最早發現於1898年,1956年Robinson等首次從細胞培養物中分離出支原體,之後國內外關於支原體汙染細胞的報導屢見不鮮。它廣泛存在於自然界中,有100餘種。現在只要是做細胞培養並發表論文,國際期刊就要求一定要做支原體檢測。一般要一周測一次支原體。
  • 細胞總培養不好,你考慮過是支原體在作亂嗎
    大量支原體聚集在真核細胞表面(掃描電鏡照片)細胞被支原體汙染,解決方案:方法一:確認細胞已被支原體汙染,終止試驗,丟棄所有被汙染的細胞和耗材。重新復甦細胞,注意選用未被汙染的細胞株、血清和培養基,並規範操作。方法二:對於珍貴的,樣品不可再得的細胞,或價格昂貴的種子細胞,不但無法丟棄,而且作為種子細胞,還需要徹底根除支原體汙染。
  • 細胞實驗重複性差?先看看有沒有支原體汙染
    有的實驗室被支原體汙染後,如果不進行有效徹底的支原體清除,該實驗的細胞培養很難進行下去,細胞傳代3代以後狀態就急劇下滑,無法進行正常實驗,有的實驗室甚至只能指望換細胞間。該試劑盒可以在恆定的低溫下(25℃-42℃)對痕量的支原體種內保守性DNA片段進行特異性的擴增,擴增反應可以在20min內完成,該試劑盒檢測範圍涵蓋130種支原體。這可以說是目前最為理想的支原體檢測方法了。。然後,如果檢測到有支原體汙染,該如何處理呢?方法1:直接棄之!
  • 細胞培養汙染拯救及預防方法
    概論§汙染是細胞培養的大敵。預防和避免汙染是細胞培養成功的關鍵之一。§一開始就要十分重視,防止汙染,否則會前功盡棄,不僅浪費時間,而且浪費人力、物力,甚至造成無法彌補的損失。 (一)汙染的類型§細胞培養過程中的汙染不僅僅指微生物,而且還包括所有混入培養環境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質,包括生物和化學物質。1、細菌汙染§細菌汙染是實驗室細胞培養中常見的汙染,即使在細胞培養液中加入了抗菌素,也可能因為操作不慎而引起汙染。
  • 同樣是細胞被支原體汙染,怎麼挑選支原體祛除劑
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