同樣是細胞被支原體汙染，怎麼挑選支原體祛除劑

2020-11-09 DY締一生物

養細胞時，除了支原體的檢測需要定期進行外，支原體的預防和祛除也是一個重要方面。

它包括工作區域中的支原體的預防和祛除和培養箱水槽、水浴鍋中預防支原體的汙染。但一旦發生細胞培養時有支原體汙染，應如何挑選支原體祛除劑呢？

這裡指的支原體祛除劑，是加入到細胞培養基中來發揮作用。

德國MB有三種支原體祛除劑，都是加入到細胞培養基中使用。它包括：

1. 支原體祛除劑Zell Shield®

它是複合抗生素成分，抑制支原體蛋白和DNA合成，也抑制細菌和真菌。

適合細胞已發生支原體汙染，但又不願丟棄，希望繼續培養（如已轉染或大量擴增的細胞）的情況。

使用時需要採用懸浮衝洗法，並連續培養三代。具體流程如下：


據研究表明，約98％的支原體存在於細胞表面和細胞間隙。細胞傳代時，用乾淨的PBS反覆懸浮衝洗，就能把70%以上的支原體衝下來。

支原體直徑在180~350nm之間，遠遠小於細胞直徑。通過低速離心，很容易將細胞和支原體分離，棄上清即可祛除大部分支原體。

2. 支原體祛除劑Mynox® Gold（細胞保種用）

它含Mynox®和抗生素。Mynox®直接殺滅支原體，而非抑制。它適合珍貴細胞或不易獲得的生物樣本（如細胞種子）Mynox® Gold細胞毒性在5%以下，作用較溫和，細胞需培養治療4代。它尤其適合原代細胞和難養細胞的支原體的祛除。

3. 支原體祛除劑Mynox®（珍貴樣本用）

它適合珍貴細胞、不易獲得的生物樣本或病毒收穫液。

它和Mynox® Gold的區別是：它所含的Mynox®濃度比Mynox® Gold高，細胞毒性為5%~80%（具體看細胞類型），只需治療1次（≤3小時），即可根除支原體。它更適合容易生長的細胞。

不知以上介紹你是否清楚了？歡迎更多生物同仁一起探討！

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  • 細胞被支原體汙染的危害有多大
    在細胞培養過程中，支原體感染發生率達到63%，因而細胞培養過程中被支原體汙染是一個世界性的難題。當細胞（特別是傳代細胞）被支原體汙染後，細胞內的DNA、RNA及蛋白表達發生改變，而細胞的生長率一般並未發生顯著的影響，因而細胞被支原體汙染一般難以察覺。
  • 祛除細胞培養中支原體的方法
    對於費力擴增的細胞（如已轉染，或經過體外刺激），如果細胞中發現有支原體汙染， 但此細胞又不願丟棄，希望繼續培養， 推薦使用MB公司生產的專利複合抗生素Zell Shield®（支原體祛除劑）。②在祛除細胞支原體汙染的過程中，需要環境、試劑及耗材確保潔淨，無新的支原體汙染加入。只要如法操作，在使用Zell Shield®四代後，細胞中的支原體即可祛除。特點1) 高效廣譜。Zell Shield®通過阻止支原體、真菌、黴菌、致命病菌增殖過程中DNA及蛋白的合成，有效抑制上述微生物的增殖。
  • 支原體對細胞的不良影響,你應該早知道
    近日《動物醫學進展》上有一篇文章《支原體對細胞培養汙染的研究概況》（動物醫學進展，2013,34：112-117）談到 「支原體汙染細胞的嚴重性」，裡面提到： 支原體最早發現於1898年，1956年Robinson等首次從細胞培養物中分離出支原體，之後國內外關於支原體汙染細胞的報導屢見不鮮。
  • 支原體汙染的影響是什麼?如何應對呢?
    細胞培養過程中，由於實驗環境、操作者鼻腔口腔、實驗器材等很多地方都有支原體的存在。因此，細胞發生支原體汙染的頻率很高。據美國數據統計，細胞發生支原體汙染的機率在70%以上。同時，由於支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到。因此，支原體汙染不易被實驗者肉眼發覺。而支原體汙染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。
  • 實驗室/生產環境預防支原體和真菌汙染，更重要
    在疫苗生產、生物製藥和細胞培養試驗中，支原體及其他微生物汙染的預防和祛除，是保證生產質量和實驗順利的重要環節。 但在預防細胞支原體及其他微生物汙染方面，實驗室/生產環境的預防實際上更為重要，因為環境中很容易存在支原體的汙染。許多溫暖潮溼的地方，除了容易滋生支原體，還容易生長真菌和細菌。
  • 實驗室細胞培養支原體汙染怎麼辦
    概述：在細胞培養過程中，支原體感染發生率達到63%，因而細胞培養過程中被支原體汙染是一個世界性的難題。細胞培養中常遇見的有細菌汙染、真菌汙染、支原體汙染、病毒汙染等。說起支原體汙染，估計細胞培養的同學就開始犯愁了，細胞培養的老手都知道，支原體汙染非常不易察覺。
  • 細胞被支原體汙染是每個實驗室常見但不自知的事
    在此之前強調一下我的相關研究是有關衣原體的，而不是支原體。每次聽到別人問我，你的支原體做的怎麼樣的時候，雖然我嘴巴上給你解釋我做的是衣原體，但是我的內心是一萬隻草泥馬奔過的。所以看過這個分享的人要是再問我你做的支原體怎麼樣，我。。。。。。 　　這周主要講有關支原體汙染細胞的原因和樣子。
  • Nature:大量的細胞研究被支原體汙染摧毀
    賓西法尼大學的研究者John Hogenesch和Anthony Olarerin-George發現，支原體汙染遠比我們想像的更加嚴重和普遍，這篇新聞《支原體毀了多少細胞研究》發表在2014年7月29日的《Nature》，再次引發了細胞學科研工作者對於支原體汙染的關注。
  • 細胞培養中的支原體汙染的預防及處理
    國外調查證明，大約有二十多種支原體能汙染細胞，有的細胞株可以同時汙染兩種以上的支原體。 支原體汙染的來源包括工作環境的汙染、操作者本身的汙染（某些支原體在人體是正常菌群）、培養基的汙染、被汙染細胞造成的交叉汙染、實驗器材的汙染、製備細胞的原始組織或器官的汙染，等等。
  • 哪些情況下細胞會被支原體汙染,紫外照射不一定能殺滅支原體
    細胞株若受到細菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之汙染時，會嚴重的影響實驗的結果。本文威正翔禹/締一生物為您分析細胞支原體汙染之一般情況。但是若受到支原體之汙染時，細胞之外觀較無明顯變化，但是其汙染會造成細胞之生長速率緩慢、細胞產生病變之型態改變等等變化。
  • 細胞培養出現支原體汙染的危害及檢驗方法
    支原體是目前已知一類能在無生命培養基上生長繁殖的最小的原核細胞型微生物。細胞培養（特別是傳代細胞）被支原體汙染是個世界性問題。國內外研究表明，95%以上是以下四種支原體：口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）和菜氏無膽甾原體（A.laidlawii），為牛源性。國外調查證明，大約有二十多種支原體能汙染細胞，有的細胞株可以同時汙染兩種以上的支原體。
  • 細胞培養支原體汙染的判斷和處理方法
    ，光鏡下難以看清它的形態結構，並對青黴素有抗藥性，是細胞培養界的隱性殺手。主要來源是血清，支原體汙染不能用肉眼或光學顯微鏡檢查細胞觀察出來，帶有一定的隱蔽性，易被人們忽視。當細胞被支原體汙染後，在光鏡下常可見到細胞核及胞漿內出現大小不等的顆粒或空泡，細胞營養液可能毫無變化，短期內細胞沒有明顯的病理變化，也可以因為傳代或換液而緩解。只有當汙染嚴重時才影響細胞增殖，使細胞脫落。支原體可以與宿主細胞形成一個共生關係，使汙染不斷擴大。
  • 不可小看支原體汙染問題
    在培養細胞時，人們常常關注細菌和真菌的汙染，認為它們是細胞培養的主要幹擾因素。但其實，更嚴重的是支原體 的感染，它的發生率非常高，而且不易被發現。不僅普通光鏡下無法發現支原體，而且培養基也不容易變色。只有在汙染的後期培養基才容易變黃。下圖為支原體嚴重汙染後的表現：那麼，支原體汙染為什麼發生率這麼高？
  • 分享：一種在細胞培養中支原體汙染檢測的方法
    支原體汙染是細胞培養實驗中的常見問題之一，那如果細胞被支原體汙染不明顯，出現實驗結果難以理解，重複性差等問題如何解決呢，本文締一生物為您分享：一種在細胞培養中支原體汙染檢測的方法。分享：一種在細胞培養中支原體汙染檢測的方法常規PCR