基於HPF1 / PARP1化學生物學的ADP核糖基化研究方法

2020-11-30 科學網

基於HPF1 / PARP1化學生物學的ADP核糖基化研究方法

作者：

小柯機器人

發布時間：2020/11/14 23:42:03

德國馬克斯·普朗克衰老生物學研究所Ivan Matic課題組近日取得一項新成果。經過不懈努力，他們開發了基於HPF1 / PARP1化學生物學的ADP核糖基化（ADPr）研究工具。這一研究成果發表在2020年11月12日出版的國際學術期刊《細胞》上。

研究人員開發了一種基於Ser-ADPr writer複合物磷酸化依賴的化學酶方法，用於快速、可擴展地製備一組單一、精確修飾的肽段。將這種方法與噬菌體展示技術相結合，研究人員已經開發了針對單ADPr位點特異和廣泛特異的抗體。這些重組抗體已被多種ADP-核糖基化肽進行了選擇和表徵，並通過免疫印跡和免疫螢光測試了其檢測生理條件下ADPr的能力。

Mono-ADPr蛋白質組學和在修飾位點的多-單比較顯示DNA損傷時單ADPr廣泛存在，並說明了其對PARG和ARH3的依賴性。基於該化學生物學重組抗體平臺研製的這些抗體以及將來能產生的抗體將在闡明健康和疾病個體中ADPr信號通路方面具有廣泛的應用潛能。

據了解，在合適的位置進行ADP-核糖基化修飾是探究細胞過程中這種特殊翻譯後修飾（PTM）所需工具的基礎。

附：英文原文

Title: An HPF1/PARP1-Based Chemical Biology Strategy for Exploring ADP-Ribosylation

Author: Juan José Bonfiglio, Orsolya Leidecker, Helen Dauben, Edoardo José Longarini, Thomas Colby, Pablo San Segundo-Acosta, Kathryn A. Perez, Ivan Matic

Issue&Volume: 2020/11/12

Abstract: Strategies for installing authentic ADP-ribosylation (ADPr) at desired positions arefundamental for creating the tools needed to explore this elusive post-translationalmodification (PTM) in essential cellular processes. Here, we describe a phospho-guidedchemoenzymatic approach based on the Ser-ADPr writer complex for rapid, scalable preparationof a panel of pure, precisely modified peptides. Integrating this methodology withphage display technology, we have developed site-specific as well as broad-specificityantibodies to mono-ADPr. These recombinant antibodies have been selected and characterizedusing multiple ADP-ribosylated peptides and tested by immunoblotting and immunofluorescencefor their ability to detect physiological ADPr events. Mono-ADPr proteomics and poly-to-monocomparisons at the modification site level have revealed the prevalence of mono-ADPrupon DNA damage and illustrated its dependence on PARG and ARH3. These and futuretools created on our versatile chemical biology-recombinant antibody platform havebroad potential to elucidate ADPr signaling pathways in health and disease.

DOI: 10.1016/j.cell.2020.09.055

Source: https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(20)31252-6

Cell：《細胞》，創刊於1974年。隸屬於細胞出版社，最新IF：36.216

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