為什麼我們要用瓊脂糖凝膠做電泳載體?

2021-01-08 德晟生化試劑原料

常用的電泳實驗載體:

1、醋酸纖維素薄膜電泳 :醋酸纖維素薄膜電泳是以醋酸纖維素薄膜為支持物,它是纖維素的醋酸酯,由纖維素的羥基經乙醯化而製成。

2、 瓊脂糖凝膠電泳 :瓊脂糖凝膠電泳是一種以瓊脂糖凝膠為支持物的凝膠電泳。

3、聚丙烯醯胺凝膠電泳 :聚丙烯醯胺凝膠是由單體丙烯醯胺和交聯劑又稱為共聚體的N,N』-甲叉雙丙烯醯胺(簡稱Bis)在加速劑和催化劑的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠,以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯醯胺凝膠電泳(簡稱PAGE)。

4、等電聚焦電泳 :等電聚焦電泳是利用具有pH梯度的電泳介質來分離等電點(pI)不同的蛋白質的電泳技術。

小師弟瓊脂糖凝膠電泳試劑盒

瓊脂糖凝膠電泳其分析原理與其它支持物電泳的最主要區別是:它兼有「分子篩」和「電泳」的雙重作用。瓊脂糖凝膠具有網絡結構,直接參與帶電顆粒的分離過程,在電泳中,物質分子通過空隙時會受到阻力,大分子物質在泳動時受到的阻力比小分子大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅依賴於淨電荷的性質和數量,而且還取決於分子大小,這就大大地提高了分辨能力。

瓊脂糖系天然的瓊脂加工製得,天然瓊脂是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(約佔80%)及瓊脂膠組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷。而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由於這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象。所以常用於血清蛋白、血紅蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脫氫酶、鹼性磷酸酶等同工酶的分離和鑑定,為臨床某些疾病的鑑別診斷提供了可靠的依據。與免疫化學反應相結合發展成為免疫電泳技術,用於分離和檢測抗原。可對目前常用的瓊脂糖進行某些修飾,如引入化學基團羥乙基,則可使瓊脂糖在65℃左右便能熔化,被稱為低熔點瓊脂糖。該溫度低於DNA的熔點,而且凝膠強度又無明顯改變。以此為支持物進行電泳,稱為低熔點瓊脂糖凝膠電泳,主要應用於DNA研究。如DNA鑑定,DNA限制性內切酶圖譜製作等,為DNA分子及其片段分子量測定和DNA分子構象的分析提供了重要手段。

總結瓊脂糖凝膠電泳的優點如下:

1. 瓊脂糖凝膠電泳操作簡單,電泳速度快,樣品不需事先處理就可以進行電泳。

2. 瓊脂糖凝膠結構均勻,含水量大(約佔98%~99%),近似自由電泳,樣品擴散較自由電流,對樣品吸附極微,因此電泳圖譜清晰,解析度高,重複性好。

3. 瓊脂糖透明無紫外吸收,電泳過程和結果可直接用紫外光燈檢測及定量測定。

4. 電泳後區帶易染色,樣品極易洗脫,便於定量測定。製成幹膜可長期保存。

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