電泳知識小課堂---瓊脂糖凝膠電泳

2021-01-15 匯佰生物

關於瓊脂糖凝膠電泳的實驗技巧和方法以及注意事項


1 )加樣時槍頭不要碰壞凝膠壁,否則DNA的帶型將不會整齊,加樣前要用槍頭吸打凝膠孔中的溶液 ,以趕走樣品空中的氣泡。

2 )每孔最大DNA.上樣量決定於DNA樣品片段的大小、數目及樣品孔形狀與容量。

3 )應注意每孔最大樣容量及樣品孔體積r以免加樣時樣品流入附近樣品孔造成交叉汙染， 影響結果分析。

4 )在實驗加樣中不一定每一一個樣品都換一個槍頭,可在陽極槽中反覆吸打電泳緩衝液以清洗。( 對於Southern印跡轉移和需要回收

5 )凝膠中加入EB進行電泳,便於紫外線下觀察電泳狀態但EB會導致線形DNA遷移率下降,這在酶切質粒與空白對照質粒-起電泳時應值得注意。

6 )電泳過程中,溴化乙錠向負極移動，與DNA泳動的方向相反,較長時間的電泳會造成靠正極方向的凝膠中溴化乙錠含量低,會對含量較少的小分子DNA片段檢測困難。處理方法是:將凝膠在0.5ug/ml的EB溶液中染色30 - 45分鐘。

7 )判斷正負極的另-方法是負極氣泡比正極氣泡多一倍。片段的電泳,則應該每一個樣品用一個槍頭加樣。避免樣品交叉汙染。

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