實驗新人必讀-蛋白定量上手攻略

在蛋白質的提取、純化和分析過程中，蛋白質的定量隨處可見。比如在裂解細胞之後，應對各個樣品中的蛋白進行定量，確保下遊實驗的數據平行度；在電泳之前進行定量，保證上樣量一致，這樣目的條帶含量的變化才有說服力。

BCA法是最經典的蛋白定量方法之一，在Google學術搜索中已有14萬條結果。與Bradford或Lowry等方法相比，BCA法對去垢劑的兼容性更強，也有著高度的均一性，不同蛋白質之間的變異性更小。BCA法還具有更高的線性度，它的線性範圍是20至2000 µg/mL。即使是低至5 µg/mL的樣品，通過改良操作也能夠靈敏檢測。

蛋白定量雖然是常規操作，由於涉及多個步驟的計算與處理，操作時還是容易出錯。我們基於經典BCA法歸納了實操指南，以及高頻問題解答，快來看看吧。

按照表 1 製備一組蛋白質標準品。將一安瓿的牛血清白蛋白標準品（BSA）稀釋到幾個乾淨的小瓶中，建議使用與待測樣本相同的稀釋液。

表 1. 梯度稀釋牛血清白蛋白（BSA）標準品

1.計算所需的工作液總體積。公式：(標準品的個數 +待測蛋白質樣本的個數) X ( 實驗重複次數) X (用於每個樣本的工作液的體積)

註：在微孔板方案中，每個樣本需要 200μl 工作液。

2.將 50 份 BCA 試劑 A 與 1 份 BCA 試劑 B 混合（試劑 A 與試劑 B 的比例=50:1），製備工作液。

註：當試劑 B 加入試劑 A 中時，開始會觀察到渾濁產生，經攪拌後渾濁會迅速消失，得到綠色澄清工作液。工作液儲存於密閉容器中，在室溫下可穩定保存數天。示例: 如總共需要7.2mL BCA工作液，則混合7.1mL試劑A與142μL試劑B。