THP-1細胞基因編輯服務-點突變

CRISPR-U可在THP-1細胞中進行高效的基因編輯

THP-1是一種近四倍體的懸浮細胞，常規的基因編輯方法在THP-1中陽性率很低。由於CRISPR/Cas9易於構建和在人細胞中的毒性較低，在基因編輯應用中備受青睞。CRISPR-U是源井生物自主研發的應用於基因編輯細胞系的獨家技術（基於CRISPR / Cas9技術），採用了最大化基因組編輯效率的策略，基因切割效率和重組效率是普通的CRISPR/Cas9技術的10倍以上，可輕鬆實現基因敲除（KO）、點突變（PM）、基因敲入（KI）。因此，我們在THP-1中獲得的陽性克隆的概率比傳統方法更高。我們可以定製您感興趣的基因編輯THP-1細胞系及其他單核細胞系，亦可為您實現各種轉基因的需求，助力您的研究。

源井可提供的THP-1細胞基因編輯服務：

CRISPR-U基因點突變THP-1細胞：

通過核轉染法將CRISPR/Cas9載體和ssODN共轉入細胞中，gRNA和Cas9複合物造成靶位點DNA雙鏈斷裂後，THP-1細胞以攜帶目標點突變的ssODN作為模板進行同源重組修復（HDR），將目標點突變重組到基因組靶位點。

· 細胞疾病模型建模

通過HDR，攜帶點突變序列的donor oligo (ssODN)替換WT對應的鹼基。

· 細胞疾病模型修復

通過HDR，攜帶WT序列的donor oligo (ssODN)替換對應的突變鹼基。

應用案例：

使用CRISPR/Cas9與THP-1細胞，構建慢性肉芽腫病(CGD)疾病模型，有助於開發更有效的疾病治療方法

慢性肉芽腫病(CGD)是一種罕見的X連鎖的遺傳病，由於機體的CYBB基因發生突變或缺失，導致巨噬細胞缺乏煙醯胺腺嘌呤二核苷磷酸

(NADPH)氧化酶，無法產生過氧化氫來有效殺滅入侵的微生物，這通常會導致細菌和真菌等微生物引起的嚴重反覆感染。有研究者利用CRISPR/Cas9技術，在THP-1細胞中進行CYBB基因的敲除和點突變c.90C>G（該點突變曾在一例CGD患者中被發現），成功構建了首個CGD的細胞模型。

對比野生型的THP-1細胞，研究者構建的2個KO克隆（#3和#27）和點突變克隆（#2）在經過PMA和LPS誘導後均出現了H2O2水平降低，同時IL-1β、TNF-α和IL-6釋放量的明顯上升，這與CGD疾病中巨噬細胞的表現一致。

隨後，研究者通過慢病毒轉染的形式進行CYBB回補，則扭轉了這個局面。這種新的CGD細胞模型為疾病研究提供了強有力的工具，將有助於開發更高效的治療方法，從而改善患者的生活質量[4]。

CRISPR-U可以通過核轉染法高效地將CRISPR/Cas9以及ssODN共轉入THP-1細胞中，篩選後挑選單克隆培養。選擇不同的克隆分別進行靶位點擴增及測序，篩選出點突變純合的陽性克隆，生成您需要的點突變細胞模型。

參考文獻：

Benyoucef A, Marchitto L, Touzot F.CRISPR gene-engineered CYBBko THP-1 cell lines highlight the crucialrole of NADPH-induced reactive oxygen species for regulatinginflammasome activation[J]. Journal of Allergy and Clinical Immunology,2020.

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