《保健食品原料目錄 螺旋藻》及原料技術要求

《保健食品原料目錄 螺旋藻》

螺旋藻原料技術要求

【來源】

螺旋藻為鈍頂螺旋藻（Arthrospira platensis）和極大螺旋藻（Arthrospira maxima）經人工培養、採收、清洗的藻泥，經過噴霧乾燥，或者其他乾燥方法並經殺菌獲得的乾粉。

【感官要求】

應符合表1規定。

表1 感官指標

【鑑別】

取少量樣品於水中，充分震蕩攪拌使藻粉顆粒分散，顯微鏡視野中應呈分散、綠色的S形、L形、C形或螺旋形的藻絲體，不得有明顯異物。

【理化指標】

應符合表2規定。

表2 理化指標

【微生物指標】

應符合表3規定。

表3 微生物指標

註：n為同一批次產品應採集的樣品件數；c為最大可允許超出m值的樣品數；m為致病菌指標可接受水平的限量值；M為致病菌指標的最高安全限量值。

【標誌性成分指標】

應符合表4規定。

表4標誌性成分指標

1β-胡蘿蔔素的測定

1.1試劑和材料

1.1.1氫氧化鉀溶液:稱固體氫氧化鉀500g,加入500mL水溶解。臨用前配製。

1.1.2無水硫酸鈉(Na2SO4)，分析純

1.1.3抗壞血酸(C6H8O6)，分析純

1.1.4石油醚：沸程30℃~60℃，分析純

1.1.5甲醇(CH4O)，色譜純

1.1.6乙腈(C2H3N)，色譜純

1.1.7甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]，色譜純

1.1.8二氯甲烷(CH2Cl2)，色譜純

1.1.9 無水乙醇(C2H6O)，優級純

1.1.10 水，符合GB/T6682規定的一級水

1.1.11 碘溶液(I2):0.5 mol/L濃度

1.1.12 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(C15H24O，BHT)

1.2 儀器和設備

1.2.1勻漿機

1.2.2 高速粉碎機

1.2.3恆溫振蕩水浴箱（控溫精度±1℃）

1.2.4旋轉蒸發器

1.2.5氮吹儀

1.2.6紫外-可見光分光光度計

1.2.7高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)

1.3 對照品溶液製備

1.3.1 β-胡蘿蔔素標準儲備液(500μg/mL)

準確稱取β-胡蘿蔔素標準品25mg(精確到0.1mg)，加入0.125gBHT，用二氯甲烷溶解，轉移至50mL棕色容量瓶中定容至刻度。

1.3.2β-胡蘿蔔素標準中間液(100 μg/mL)

從β-胡蘿蔔素標準儲備液中準確移取10.0 mL溶液於50mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度。

1.3.3 β-胡蘿蔔素標準工作液

從β-胡蘿蔔素標準中間液中分別準確移取0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00 mL、10.00 mL溶液至6個100 mL棕色容量瓶。用二氯甲烷定容至刻度，得到濃度為0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、3.0 μg/mL、4.0 μg/mL、10 μg/mL的系列標準工作液。

1.3.4 碘乙醇溶液(0.05mol/L)

吸取5mL碘溶液,用乙醇稀釋至50mL,混勻。

1.3.5 異構化β-胡蘿蔔素溶液

取10 mLβ-胡蘿蔔素標準儲備液於燒杯中，加入20 μL碘乙醇溶液，搖勻後於日光下或距離40 W日光燈30 cm處照射15 min，用二氯甲烷稀釋至50 mL。搖勻後過0.45 μm濾膜，備HPLC色譜分析用。

1.4供試品溶液製備

1.4.1 預處理

精確稱取1g~5g (精確至0.001g)螺旋藻粉，轉至250mL錐形瓶中，加入1g抗壞血酸、75mL無水乙醇，於60℃±1℃水浴振蕩30min。

1.4.2 皂化

加入25mL氫氧化鉀溶液，蓋上瓶塞。置於已預熱至53℃±2℃恆溫振蕩水浴箱中，皂化30min。取出，靜置，冷卻到室溫。

1.4.3 試樣萃取

將皂化液轉入500mL分液漏鬥中，加入100mL石油醚，輕輕搖動，排氣，蓋好瓶塞，室溫下振蕩，10min後靜置分層，將水相轉入另一分液漏鬥中按上述方法進行第二次提取。合併有機相，用水洗至近中性。棄水相，有機相通過無水硫酸鈉過濾脫水。濾液收入500mL蒸發瓶中，於旋轉蒸發器上40℃±2℃減壓濃縮，近幹。用氮氣吹乾，用移液管準確加入5.0mL二氯甲烷，蓋上瓶塞，充分溶解提取物。經0.45 μm膜過濾後，棄出初始約1mL濾液後收集至進樣瓶中，備用。

1.5色譜條件

a) 色譜柱：C30柱，柱長150mm，內徑4.6mm，粒徑5μm，或等效柱；

b) 流動相：A相：甲醇:乙腈:水=73.5:24.5:2；

B相：甲基叔丁基醚；

表5 梯度程序

c) 流速：1.0mL/min；

d) 檢測波長：450nm；

e) 柱溫：30 ℃±1 ℃；

f) 進樣體積：20μL。

1.6 測定

在相同色譜條件下,將待測液注入液相色譜儀中,以保留時間定性,根據峰面積採用外標法定量,β-胡蘿蔔素根據全反式β-胡蘿蔔素響應因子進行計算。

1.7 全反式β-胡蘿蔔素色譜純度的計算

1.7.1 β-胡蘿蔔素異構體保留時間的確認

分別取β-胡蘿蔔素標準中間液(100 μg/mL)和異構化β-胡蘿蔔素溶液,按照色譜條件注入HPLC儀進行色譜分析。根據β-胡蘿蔔素標準中間液的色譜圖確認全反式β-胡蘿蔔素的保留時間；對比β-胡蘿蔔素標準中間液和異構化β-胡蘿蔔素溶液色譜圖中各峰面積變化，以及與全反式β-胡蘿蔔素的位置關係確認順式β-胡蘿蔔素異構體的保留時間：全反式β-胡蘿蔔素前較大的色譜峰為13-順式-β-胡蘿蔔素，緊鄰全反式β-胡蘿蔔素後較大的色譜峰為9-順式-β-胡蘿蔔素，13-順式-β-胡蘿蔔素前是15-順式-β-胡蘿蔔素，另外可能還有其他較小的順式結構色譜峰，色譜圖見圖。

1.7.2 全反式β反胡蘿蔔素標準液色譜純度的計算

取β-胡蘿蔔素標準工作液(3 μg/mL),按照色譜條件進行HPLC分析,重複進樣6次。計算全反式β-胡蘿蔔素色譜峰的峰面積、全反式與上述各順式結構的峰面積總和,全反式β-胡蘿蔔素色譜純度（CP）按公式計算。

CP———全反式β-胡蘿蔔素色譜純度，%；

all-E———全反式β-胡蘿蔔素色譜峰峰面積平均值，單位為峰面積(AU)；

sum———全反式β-胡蘿蔔素及各順式結構峰面積總和平均值,單位為峰面積(AU)。

1.8 結果計算

計算全反式β-胡蘿蔔素響應因子

將β-胡蘿蔔素混合標準工作液注入HPLC儀中(色譜圖見圖1),根據保留時間定性,測定β-胡蘿蔔素各異構體峰面積。

β-胡蘿蔔素根據標準工作液標定濃度、全反式β-胡蘿蔔素6次測定峰面積平均值、全反式β-胡蘿蔔素色譜純度（CP）,按公式計算全反式β-胡蘿蔔素響應因子。

式中:

RF———全反式β-胡蘿蔔素響應因子,單位為峰面積毫升每微克(AU·mL/μg)；

all-E———全反式β-胡蘿蔔素標準工作液色譜峰峰面積平均值，單位為峰面積(AU)；

ρ———β-胡蘿蔔素標準工作液標定濃度,單位為微克每毫升(μg/mL)；

CP———全反式β-胡蘿蔔素的色譜純度，%。

試樣中β-胡蘿蔔素含量按下公式計算:

式中:

Xβ———試樣中β-胡蘿蔔素的含量,單位為微克每百克(μg/100g);

Aall-E———試樣待測液中全反式β-胡蘿蔔素峰面積,單位為峰面積(AU);

A9Z———試樣待測液中9-順式-β-胡蘿蔔素的峰面積,單位為峰面積(AU);

A13Z———試樣待測液中13-順式-β-胡蘿蔔素的峰面積,單位為峰面積(AU);

1.2 ———13-順式-β-胡蘿蔔素的相對校正因子;

A15Z———試樣待測液中15-順式-β-胡蘿蔔素的峰面積,單位為峰面積(AU);

1.4 ———15-順式-β-胡蘿蔔素的相對校正因子;

AxZ———試樣待測液中其他順式β-胡蘿蔔素的峰面積,單位為峰面積(AU);

V———試樣液定容體積,單位為毫升(mL);

100 ———將結果表示為微克每百克(μg/100g)的係數;

RF———全反式β-胡蘿蔔素響應因子,單位為峰面積毫升每微克(AU·mL/μg);

m———試樣質量,單位為克(g)。

注1:由於β-胡蘿蔔素各異構體百分吸光係數不同(見附錄D),所以在β-胡蘿蔔素計算過程中,需採用相對校正因子對結果進行校正。

注2:如果試樣中其他順式β-胡蘿蔔素含量較低,可不進行計算。

1.9 色譜圖

圖1 β-胡蘿蔔素檢測色譜圖

說明：

Ⅰ——15-順式-β-胡蘿蔔素；

Ⅱ——13-順式-β-胡蘿蔔素；

Ⅲ——全反式α-胡蘿蔔素；

Ⅳ——全反式β-胡蘿蔔素；

Ⅴ——9-順式-β-胡蘿蔔素。

2 藻藍蛋白的測定

2.1試劑

磷酸鹽緩衝溶液:將0.1 mol/L磷酸二氫鉀溶液與0.1 mol/L磷酸氫二鉀溶液(45+55V/V) 混合，溶液pH值為7.0。

2.2儀器和設備

2.2.1 分光光度計

2.2.2 超聲波振蕩器

2.2.3 離心機（3000 r/min）

2.2.4 低溫冰箱（-20 ℃）

2.2.5 離心管（50 mL）。

2.3供試品溶液製備

稱取試樣0.25-0.5g（精確至0.0001g）。用緩衝液（2.1項）溶解，超聲振蕩5 min.定容於250 mL容量瓶中，搖勻。將溶液全部轉入250 mL廣口塑料瓶，置於-20℃冰箱內冷凍12h(或放置過夜)。取出解凍，搖勻。

2.4 測定

取部分溶液於離心管中，在3000r/min轉速下離心15min取上層清液.1 cm比色皿，在分光光度計上分別測定620 nm、652 nm、562 nm處的吸光度，用緩衝液(2.1項)做空白。

2.5 結果計算

X1——測試液中藻藍素的含量，單位為毫克每毫升(mg/mL)；

X2——測試液中異藻藍素的含量，單位為毫克每毫升(mg/mL)；

X3——測試液中藻紅素的含量，單位為毫克每毫升(mg/mL)；

A——相應波長處(620nm,652nm,562nm)測得吸光值；

X4——試樣中藻藍蛋白的質量分數，單位為克每100克(g/100g)；

V——樣品定容體積，單位為毫升(mL)。

m——試樣質量，單位為克(g)。

測定結果取平行試驗結果的算術平均值，保留小數點後第二位。

平行試驗允許誤差(相對)不大於4%。

注2 整個操作過程須注意避光，分光光度測定應在15 min 內完成。

【儲存】包裝應密封、牢固、防潮、不易破損，貯藏在遮蔭、乾燥、通風的庫房內

【產品的劑型】片劑、顆粒劑、硬膠囊

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（信息來源：國家市場監督管理總局；編發：北京天健華成國際投資顧問有限公司保健食品註冊部）