蛋白質鹽析與透析

蛋白質鹽析與透析

一、       目的

學習鹽析與透析的基本原理和操作。

二、       原理

向蛋白質溶液中加入大量中性鹽可使蛋白質的溶解度降低從溶液中析出，這種現象稱為鹽析。

蛋白質是大分子物質，不能透過透析膜而小分子物質可以自由透過。在分離提純蛋白質的過程中，常利用透析的方法使蛋白質與小分子物質分開。

三、       實驗步驟

1.     透析袋（前）處理：先將一適當大小和長度的透析管放在1mol/L EDTA溶液中，煮沸10分鐘，再在2％ NaHCO3溶液中煮沸10分鐘，然後再在蒸餾水中煮沸10分鐘即可（已做）。

2.     取5ml蛋白質溶液於離心管中，加4g硫酸銨粉末，攪拌使之溶解。然後在4℃下靜置20分鐘，出現絮狀沉澱。

3.     離心：將離心管在4000轉/分的速度下離心20分鐘。

4.     裝透析袋：離心後倒掉上清液，加5ml蒸餾水溶解沉澱物，然後小心倒入透析袋中，紮緊上口。

5.     將紮好的透析袋放入盛有蒸餾水的燒杯中，進行透析，並不斷攪拌。

6.     每隔適當時間（5分鐘），將氯化鋇滴入燒杯的蒸餾水中，觀察是否有沉澱現象。

7．解釋實驗現象。

  四、注意事項

     1. 離心機配平。

     2. 透析袋口要紮緊。