季節 物種 浮遊動物共生細菌和海水細菌豐度 季節變化 影響因素

2021-02-23 水母的秘密

    將來自各個組的橈足類動物收集到無菌的200µm網眼篩上，並反衝洗到無菌的培養皿中。4個重複，每個重複中有3隻橈足類動物，用於評估腸道清除前與橈足類動物共生的細菌豐度。將所有剩餘的橈足類轉移到250ml具有適當銨濃度的0.2µm過濾的ASW中，並清除其內臟3.5小時，以消除與食物共生的細菌。清除腸道後，將每個動物組再次濃縮到滅菌的200 µm網眼篩上，並反衝洗到無菌培養皿中。腸內清除後，每組3隻橈足類動物的4個重複樣本用於評估與橈足類動物共生的細菌豐度。對樣品中的所有橈足類進行拍照，並以與野外樣品相同的方式處理與橈足類共生的細菌，不同之處在於樣品在用甲醛超聲處理（最終濃度為4％）後保存，以延長其保存時間。

    橈足類動物有明顯的腸壁，建立了4種移植處理方法：（1）在低銨態下飼養的橈足類保持在低銨態（L–L處理）；（2）在低銨態下生長的橈足類轉移到高銨態下（L–H處理）；（3）在高銨態下生長的橈足類轉移至低銨態（H–L處理）；（4）在高銨態下養成的橈足類保持在高銨態下（H–H處理）。每個重複，將3隻排空腸道的橈足類放在無菌的12孔組織培養板中各加入5ml對應處理的水。建立無橈足類的對照。在實驗開始時針對每種銨濃度採集5ml水樣品，以確定初始的自由生活細菌的豐度。將所有處理在19℃下孵育約24小時。孵育後，用移液管輕輕移出每個重複中的3隻橈足類，照相以進行生物量估計，合併到一個微量離心管中，並按上述方法處理與橈足類動物共生的細菌。在少數情況下，橈足類個別個體在孵育過程中死亡，在測定前將其除去。來自每個重複樣品的環境水的總體積收集在無菌的15 ml離心管中，並用甲醛（最終濃度為4％）保存。每個樣品的全部體積都用DAPI染色，以進行FLB計數。

本研究只進行了浮遊動物計數，大致物種鑑定和共生細菌以及海水細菌豐度的顯微鏡計數，沒有進行浮遊動物的和細菌的測序。

    下圖為海水中自由生活的微生物和浮遊動物共生微生物的豐度統計。通常，冬季和早春的自由生存細菌濃度最低，夏季升高，8月達到峰值。浮遊動物共生細菌的數量每月變化。浮遊動物共生細菌對總細菌豐度的貢獻是根據約克河的平均每月Acartia密度（Elliott＆Tang，2011），每個Acartia的平均每月細菌數以及由Acartia組成的總浮遊動物的比例估算的。研究表明全年浮遊動物共生細菌佔約克河水體細菌總數的不到0.1％。

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