結晶紫法和rdU標記法檢測細胞增殖的介紹

2021-01-08 吉至試劑

結晶紫法:

1.體外細胞培養結束後,去培養液,加入11%的戊二醛固定,置于振蕩器上搖20min。

2.固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗淨。

3.置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。

4.加入0.1%的結晶紫液對細胞染色,振搖30min。

5.用蒸餾水洗滌,至多餘的結晶紫液衝洗乾淨。

6.置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。

7.加入10%的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。

8.1h後在酶標儀上測定光吸收度,波長595nm。

rdU標記法:

1.細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中(內放置一蓋玻片),培養1天,用含0.4% FCS培養液同步化3天,使絕大多數細胞處於G0期。

2.終止細胞培養前,加入BrdU(終濃度為30μg/L),37℃,孵育40min。

3.棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。

4.甲醇/醋酸固定10min。

5.經固定的玻片空氣乾燥,0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。

6.5%正常兔血清封閉。

7.甲醯胺100℃,5min變性核酸。

8.冰浴冷卻後PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。

9.按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數,計算標記指數(LI)

相關焦點

  • 細胞增殖與活性檢測,你弄混了嗎?
    細胞增殖是指細胞在周期調控的因子下,通過DNA複製等反應,完成細胞分裂的過程。增殖檢測一般是分析分裂中的細胞數量的變化,進而反應細胞的生長狀態及活性,細胞增殖檢測主要分為四類:DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞增殖相關抗原檢測和ATP濃度檢測。
  • 「實驗」細胞增殖—培養細胞增殖動力學檢測
    一、實驗目的1.了解細胞增殖動力學的主要指標。2.掌握細胞增殖動力學的檢測方法。3.掌握MTT法檢測細胞增殖的工作原理。二、實驗原理有絲分裂指數和生長曲線是細胞增殖動力學的主要指標。有絲分裂指數是指處於分裂期的細胞數佔細胞總數的百分比。MTT法的原理是活細胞 線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢(Zā)並沉澱在細胞中,而死細胞則無此功能。DMSO能溶解細胞中的甲臢(Zā),用酶連檢測儀在490nm處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。三、試劑與器材1.材料:LN299人膠質瘤細胞系。
  • 【應用筆記】-利用無標記細胞計數進行細胞增殖動力學分析
    在評估藥物治療中的細胞應答過程時,細胞增殖動力學分析經常用於對細胞種類及生長速度進行觀察。
  • CCK8細胞增殖與毒性檢測試劑的應用
    來源:ChemicalBook背景及概述[1]CCK-8法使用方便,省去了洗滌細胞,並且檢測快速,靈敏度高,重複性優於MTr法,對細胞毒性小。CellCountingKit-8(CCK-8試劑盒)是由日本同仁化學研究所(Dojindo)開發的檢測細胞增殖、細胞毒性的試劑盒,為MTT法的替代方法,試劑盒中採用自己開發的水溶性四唑鹽-WST-8,在日本,美國,歐洲等國家地區均持有專利,同仁化學研究所於2006年在中國獲得了WST-8的註冊商標。
  • MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒操作說明書
    53:57 圍觀321次 我要分享 MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒產品簡介:MTT 比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。
  • 用基於螢光的方法來評價細胞的增殖
    藉助流式細胞儀利用螢光標記的抗 BrdU 的抗體來檢測在 DNA 合成過程中摻入的 BrdU 的方法可以間接檢測快速增值的細胞。 Hoechst 染料也可被用於檢測 BrdU 的摻入,因為 BrdU 摻入的地方其螢光信號被淬滅。這種方法也可被用於細胞增值的研究,特別是細胞循環分析中。
  • 細胞增殖檢測:H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法
    一、實驗原理:   T細胞、B細胞表面具有識別抗原的受體和有絲分裂原受體,在特異性抗原刺激下可使相應淋巴細胞克隆發生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)、抗CD2和抗CD3McAb 作為多克隆刺激劑可選擇性地刺激T細胞增殖;上海創賽科技提供刀豆蛋白A IV,ConA Type IV,11028-71-0,商品編號:B11000088-25mg,價格118.3元。
  • 一步步教你用BrdU檢測細胞增殖
    似於基於3H-胸腺嘧啶核苷摻入的增殖測量,可以通過使用5-溴2'-脫氧尿苷(BrdU)(胸苷的合成核苷類似物)通過FCM監測細胞分裂。為此,將BrdU摻入新合成的複製細胞DNA中(在細胞周期的S期),並使用對BrdU特異的螢光素單抗檢測摻入比例。
  • SUNS丨人臍帶間充質幹細胞對HaCaT細胞增殖與遷移的影響
    章毅  陳侃俊  伍婷  張晗  祁成  孔凡瑞  陳亮  胡肖希  李品宙採用II型膠原酶消化法從新生兒臍帶中分離製備hucMSCs,用流式細胞術鑑定 P3代hucMSCs表面標記抗原,用油紅O染色、茜素紅S染色和Masson染色進行間充質幹細胞三向分化能力鑑定;以人表皮角質細胞系HaCaT為研究模型,在transwell上室接種P3代hucMSCs進行共培養,顯微鏡觀察
  • xCELLigence系統—無標記生物檢測新技術
    目前,大部分細胞檢測依然採用傳統的"終點法",僅僅給實驗定格了一個最終結果,而且經常需要標記和破壞細胞。然而,細胞是活體,其生物學和細胞進程是動態而非靜態的,導致了當前細胞分析法的最大限制。因此,為了更充分的了解和測量生物學和細胞進程,應當使用一種非侵入性的系統,來記錄細胞應答某些刺激(如藥物處理或某種生長因子刺激)時所產生的動態變化。
  • 實時無標記細胞分析系統Maestro Z,追蹤免疫細胞介導的細胞殺傷
    美國Mastro Z實時無標記細胞分析系統,是基於阻抗技術研發的第三代無標記、實時、非侵入式細胞分析設備,於2019年秋季上市,其培養檢測一體機設計、強大的全自動數據分析,成為長時間不間斷細胞檢測的有力工具。
  • 微小RNA-138-5p與軟骨細胞增殖和自噬的關係
    近年的研究發現mircoRNA在調控軟骨細胞自噬過程中發揮了重要的作用,但其作用的分子機制還不太清楚。目的:探究微小RNA-138-5p(miR-138-5p)對軟骨細胞增殖和自噬活性的調節及其作用機制。
  • 第三節 細胞免疫功能的檢測
    因此細胞功能測定不僅涉及T細胞的數量和功能與包括各類因子活性測定,因此評價機體的細胞免疫功能不僅程序複雜,且很難標準化   一、遲髮型過敏反應的體外檢測方法   皮膚試驗和接觸性過敏的誘發是檢測遲髮型過敏反應(DTH)的兩種常用方法。皮膚試驗中誘發對曾經使病人致敏的抗原的再次應答,而接觸性過敏是測試受者對從未接觸過的物質發生致敏的能力。
  • 【腎上腺相關研究】下調ATF3表達抑制腎上腺皮質腺癌細胞增殖及其機制研究
    蛋白表達;四甲基偶氮唑鹽(MTT)和異硫氰酸胍標記磷脂結蛋白(AnnexinV-FITC)/碘化丙啶(PI)分別測定細胞增殖率和細胞凋亡率;NCI-H259R細胞分別經NVP-BEZ235、Perifosine、BKM120、IWP-2、PP2、KN93、Everolimus作用後,運用實時螢光定量PCR(realtime PCR)測定ATF3 mRNA的表達;MTT比色法檢測ATF3對抑制相關信號通路後細胞增殖的影響
  • 硫化氫緩釋供體ADT-OH對神經前體細胞增殖的調控
    腦室帶區神經前體細胞:又稱為神經祖細胞,這些祖細胞既可增殖亦可分化為神經元和膠質細胞,在胚胎發育第12天之前,神經前體細胞進行大量增殖形成一個細胞池,為後期大腦皮質的發育提供條件。目的:探究ADT-OH對胚胎期大腦皮質神經前體細胞增殖的影響。
  • 流式細胞術檢測細胞凋亡還有哪些方法?
    前面講到利用流式細胞術進行細胞凋亡檢測的annexinV/PI雙染色法,今天主要簡要介紹SYTO/PI雙染色法、細胞DNA含量分析法、TUNEL法。根據SYTO發射螢光信號波長的不同,主要可以分為藍、綠、橙和紅四大類。用SYTO染料標記細胞後,尤其是與PI染料共同標記時可以區分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞,因此其最主要的應用就是檢測細胞凋亡,其中最具有代表性的是SYTO11、SYTO16、SYTO17和SYTO62等。
  • 常用細胞凋亡檢測方法(四)
    五 TUNEL法   細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3'-OH末端,可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,將脫氧核糖核苷酸和螢光素、過氧化物酶、鹼性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端,從而可進行凋亡細胞的檢測,這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法
  • 如何檢測晚期時的細胞特徵?
    二、細胞凋亡的過程細胞凋亡是1973年Kerr和Wyllin zui先提出這一概念。細胞凋亡的過程大致可分為以下幾個階段:接受凋亡信號→凋亡調控分子間的相互作用→蛋白水解酶的活化(Caspase)→進入連續反應過程。細胞處於不同的凋亡階段具有不同的生物學特徵,典型的特徵包括:1)細胞膜PS(磷脂醯絲氨酸)外翻;2)線粒體膜電位喪失;3)細胞核濃縮和斷裂。
  • MTT實驗測定細胞增殖詳細操作手冊
    MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢[jiǎ zā](Formazan)並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲臢,用酶聯免疫檢測儀在570 nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數範圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。
  • MTT法和CCK-8測定細胞毒性和增值的優劣比較
    首頁 » MTT法和CCK-8測定細胞毒性和增值的優劣比較 MTT法和CCK-8測定細胞毒性和增值的優劣比較 來源:丁香園論壇 2007-01-10 21:41