流式細胞術CV值重要嗎?怎麼用?

刀刀明

做流式細胞術cv值控制在多少合適，我最近做treg發現cv值達到40-50%，哪位前輩能就cv的具體含、其影響因素及如何控制做一下解釋、交流一下寶貴經驗。謝謝了

儘管對質控方面不是很精通，但我還是鬥膽回答一下，拋磚引玉。

對於流式結果分布的評價指標，目前主要有兩種，SD和CV。

1、SD（標準差，Standard Deviation）

SD的定義就是（每個點與平均值之間的距離）的幾何平均值，用數學公式表示如下：
 

這裡的Σ符號就代表總和，x代表細胞群中的每個值，m代表平均值，n代表細胞群的細胞數量。

但是流式實驗中，很難用SD對比不同次的實驗結果，因為可能你不同的實驗是在不同條件或不同機器上做的，螢光值發生了變化就容易導致此值發生較大改變。
所以，可以考慮用另一個指標CV。

2、CV（變異係數，Coefficient of Variation）

變異係數的定義是：

所以，CV是用百分率表示的，沒有單位，而且不同次的實驗，不同機器的結果均可以比較。舉個例子，一次實驗結果的平均值是100，細胞群分布範圍是90～110，另一次實驗結果平均值是1000，分布範圍是900～1100，兩者的SD結果不同，但CV值相同。

在儀器的質量控制時，經常需要用標準微球對儀器的各個螢光通道進行CV值的檢測，以保證CV值最小。

為了最好的區分G1和S期，就需要使G1的CV值儘可能小，如下圖，很明顯看出左側圖的CV值小，G1峰和S期的區分就更好。


 

當我們用染料稀釋法檢測細胞增殖時，就需要儘量使父峰和各代子峰的CV值均能達到儘可能小，以便清晰地區分出每一個峰。


上面理解了CV值的含義，現在回到@刀刀明 提出的問題，CV值在上面幾個應用中，是有要求的，質量控制方面，每家儀器廠家都會有他們相應的對每個螢光通道的CV要求，所以只要問一下工程師或者參考操作手冊即可，而細胞周期分析，Modfit軟體我記得對CV值的要求是8％，不知道有沒有記錯，對於細胞增殖倒是沒有明確要求，但當然也是越小越好。


如果你是測Treg，那麼就把CV值的要求放一邊吧，因為Treg的foxP3、CD25分布都很寬，這是正常的情況，不是儀器狀態不好或標準狀態不好。