基因功能研究，尤其是在細胞系的基因功能研究，通常是從三板斧開始的，基因幹擾、基因過表達、基因敲除，今天我們來講講，最耀眼的基因敲除！
想必大家都聽過，基因敲除和基因幹擾因為很相似，往往被不明就裡地混用，但實際上基因幹擾只是在轉錄後水平上的降低基因表達，並不能像基因敲除那樣完全地把基因從基因組中剔除，有時候也會因為背景不乾淨，導致產生的表型難以分析，如果是幹擾實驗，蛋白表達降不下去，表型差異出不來，就只能做敲除咯
江湖上一直流傳著4+2的傳說，4是四種技術手段（蛋白法、常規瞬轉質粒法、病毒法、Virus-Free穩轉質粒法），2是兩種gRNA設計策略（移碼敲除、片段敲除），親自動手的科研"汪"，或者服務公司從4+2中混搭形成了自己的風格，十八般武藝，分外熱鬧。
新人小白們，面對著4+2的江湖，內心是崩潰的。師兄說蛋白法好 見效快 乾淨無殘留；師姐告訴你 病毒法好 省事又高效；導師也有建議 說別搞那些么蛾子 瞬轉質粒價格便宜 還能藥篩；實驗方法讓人撓頭，敲除策略也不省心，A公司做移碼敲除 說高效快捷成功率高，B公司做片段敲除 說穩定省心WB乾淨……
我們就來盤點一下這個4+2的江湖，評一評這十八般武藝
4種基因敲除的技術手段
總的來說，蛋白法不需要構建載體，最快捷，但是sgRNA容易降解，操作難度大，一般更多應用於點突變和定點插入；常規瞬轉質粒法構建簡單，但是效率低；病毒法效率高，但是周期長，成本更高；Virus-Free穩轉質粒法穩定整合而不需要包病毒，效率高周期短，是一種很好的替代病毒的方法。
兩種gRNA設計策略
這是基因敲除通用的兩種方法，都能實現基因功能的沉默。
移碼敲除效率高，設計簡單，但是後續蛋白檢測風險較大，往往會出現WB敲除不乾淨的現象，導致敲除變幹擾；片段敲除需要雙gRNA同時起作用，效率較低，但是後續蛋白檢測背景乾淨，結果有保證，更好發文章。
結語：
4+2如何選擇，取決於最終目的和周期成本預算，也取決於不同細胞不同基因的類型。有位不知名的技術專家X man說過，「像293這種細胞，我閉著眼隨便做，都能拿到一堆純合子」。
最後，小海星寫得這麼用心，必須要打個小廣告咯，對於大部分細胞系的基因敲除來說，我們的Virus-Free轉座子技術結合片段敲除策略，應該是這個江湖中性價比最高的一把斧頭了。