細胞毒性T淋巴細胞的作用和研究

細胞毒性T淋巴細胞（CTL，cytotoxic T lymphocyte），又稱殺傷性T淋巴細胞，是正常人體細胞免疫的主要效應細胞，也是腫瘤免疫過繼療法主要效應細胞之一，專門分泌各種細胞因子參與免疫作用。對某些病毒、腫瘤細胞等抗原物質具有殺傷作用，與自然殺傷細胞構成機體抗病毒、抗腫瘤免疫的重要防線。

功能：特異性識別抗原肽-MHCⅠ類分子複合物，可通過脫顆粒釋放穿孔素和顆粒，直接殺傷胞內病原體（病毒和某些胞內寄生菌）感染細胞及腫瘤細胞等靶細胞。

特點：抗原（Ag）特異性、MHC限制性、可連續殺傷。

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CTL細胞對靶細胞的殺傷作用

CTL殺傷靶細胞的兩種機制：

1.粒酶途徑。CTL上的T細胞受體與靶細胞表面所呈遞的抗原相互作用，形成聚合體。CTL中的高爾基體開始堆積，含有粒酶（granzymes）的顆粒重新定位於與靶細胞相接觸的區域，並通過胞吐作用（exocytosis）釋放出穿孔素（perforin）和粒酶，後者在前者的幫助下進入靶細胞，激活細胞的凋亡（apoptosis）路徑，誘導細胞的死亡。

2.Fas途徑。某些CTL缺乏穿孔素和粒酶，它們通過Fas途徑來介導細胞毒性。CTL表面的Fas配體與靶細胞上的Fas結合，使之結合Fas相聯的死亡結構域蛋白（Fas-associated death domain protein，FADD），後者相應地引發一系列反應，導致細胞凋亡。

目前，在國內擁有獨立智慧財產權的ACTL靶向性細胞免疫治療技術（簡稱「ACTL技術」），該技術經細胞因子誘導，單核細胞轉化為具有強大抗原提呈功能的樹突狀細胞（Dendritic cells ,DC），而獲得的DC可刺激產生有效殺傷腫瘤細胞的細胞毒性T淋巴細胞（Cytotoxic T lymphocytes ,CTL）,所產生的CTL具有腫瘤抗原特異性，即靶向性。經重組腺相關病毒（Recombinant Adeno-associated virus ，rAAV）感染的DC刺激產生的CTL僅針對某種或數種腫瘤相關抗原陽性的腫瘤細胞具有殺傷作用，對抗原陰性的細胞無作用。

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ACTL技術CTL的功能研究

實驗目的：

（1）觀察CTL對COLO 205細胞的殺傷作用；

（2）觀察CTL殺傷作用的特異性(靶向性)；

（3）觀察CTL殺傷作用的MHC-I類分子(HLA-I類抗原)限制性。

實驗一：CTL殺傷效果實驗：

如上圖所示，CTL針對COLO 205細胞的殺傷作用約為46.27%；而針對K562的殺傷作用為20.94%，且他們之間存在顯著性差異。（*：P

實驗二：使用人工合成的MHC-肽四聚體，藉助細胞流式檢測技術，定量檢測待檢標本中抗原特異性T細胞數量。

PSA流式結果：

CEA流式結果：

數次檢測結果表明PSA-CTL佔受檢細胞總數的平均值為55.59%，CEA-CTL佔受檢細胞總數的平均值為47.33%，證明了特異性CTL的存在。

實驗三：添加MHC-I類分子抗體阻斷CTL殺傷腫瘤細胞實驗，使用51Cr細胞殺傷實驗證實CTL的殺傷作用是MHC-I類限制性的。

實驗結果如下：

實驗結果證實，添加MHC-I類分子抗體後，AAV/BA46激活的CTL，其殺傷腫瘤細胞的能力有所下降，證明CTL的殺傷能力是MHC-I類限制性的。

ACTL

TM

治療技術可治療的惡性腫瘤

ACTL治療適應症非常廣泛，可用於某種或數種腫瘤相關抗原陽性的肺癌、肝癌、乳腺癌、乳頭瘤病毒（HPV感染）、宮頸癌、前列腺增生、前列腺癌、腸癌、卵巢癌、鼻咽癌、食道癌、腎癌、膀胱癌、胃癌、黑色素瘤、膽管癌、胰腺癌、淋巴瘤以及骨髓瘤等惡性腫瘤的治療。