基於Sanger測序技術對EGFR 基因突變檢測方法的構建及驗證

2021-02-13 贏享分子診斷

圖14  各稀釋梯度對應測序結果

3   結論   


利用我室基因測序平臺的自建體系對正常人標本、來自於重慶醫科大學分子檢測中心已知檢測結果為野生型樣本和來自衛生部室間質評樣品進行檢測，結果均一致。該方法同時與ARMS法進行對比結果一致。並對自建方法的重複性與靈敏度進行了驗證。該自建方法可用於臨床標本檢測。

4   討論


基因檢測的方法有很多，如直接測序法、探針擴增阻滯突變系統（ARMS法）、二代測序法、高解析度溶解曲線分析技術、高效液相色譜法等。本研究建立的基因檢測方法為直接測序法（Sanger測序法），該方法仍是目前國際上基因檢測的金標準。在腫瘤用藥、感染性疾病的診斷及藥物基因代謝等方面依然有著廣泛的應用前景。二代測序法的應用由於其運行成本及後期維護的較高價格，目前在臨床上的應用依然十分有限；ARMS法操作流程、數據分析均比較簡單，從標本提取到結果的分析時間較短。相比而言Sanger測序檢測流程過於複雜，從引物的設計到DNA提取再到產物擴增和測序，花費時間較長。實驗步驟繁多，意味著不可控因素的增多，因此在進行每一個步驟的時候都要認真仔細，防止和儘量減少隨機誤差。為了確保測序結果的可靠性和準確性，實驗過程中所涉及到的儀器設備也應當定期校準和維護。本次檢測樣本的過程中，工作量的確比較大，操作過程也相對繁瑣。總體來說，本次實驗操作過程中基本沒有出現問題，數據的處理和分析也比較順利。

本研究成功建立的EGFR基因突變直接測序法適用於臨床標本檢測，並且具有良好的重複性和靈敏度。利用該檢測方法「目標明確、結果精準」的優勢，對NSCLC患者靶向用藥治療前進行EGFR基因突變檢測，可實現精準醫療和個體化治療。因此，本研究所建立的EGFR基因突變直接測序法具有較高的臨床實用價值。

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