蘭科植物菌根真菌的分離及形態學鑑定

【研究背景】

蘭科植物俗稱蘭花，在我國約有2000年的栽培歷史，是重要的觀賞花卉和藥用植物。隨著花卉產業和天然藥物產業的迅速發展，蘭科植物作為一種重要的植物資源，日益顯示出巨大的經濟價值和開發潛力，人們對蘭科植物的需求量也日益增長，天然蘭花資源日見匱乏。目前，許多蘭科植物已成為珍稀瀕危植物。因此，蘭科植物的大規模擴繁已成為蘭花產業發展的必然要求和途徑。在自然條件下，蘭科植物大都與真菌共生。組培技術的應用實現了蘭科植物的工業化育苗，但是，蘭科植物組培苗移栽後成活率低，生長緩慢，開花延遲。這已成為目前國內外蘭花產業發展的重要制約瓶頸之一，其主要原因是蘭花組培苗不易形成菌根，蘭花生長所需的營養物質不能得到充分的供應。因此，分離和篩選能促進蘭科植物生長的適宜的共生真菌，對組培苗進行高效菌根真菌的人工接種，實現菌根化，具有十分廣闊的應用前景。

【實驗器材】

1．實驗材料野生蘭花菌根。

2．培養基PDA培養基。

3．儀器和用具數碼顯微鏡、超淨工作檯、恆溫培養箱、滅菌鍋、天平、電爐等。

【實驗設計思路】

蘭花菌根真菌是一類內生真菌。分離內生菌的關鍵之一是分離材料的選擇及表面消毒時間的掌握。一般來說，選擇野生蘭花的一年生營養根分離獲得的菌株數會明顯多於幼嫩根或老根。消毒液一般採用75％乙醇、0.1％氯化汞或兩者的混合液。特別應注意的是，不同材料應採用不同的消毒時間。消毒後需用無菌水反覆衝洗，並用最後一次衝洗後的無菌水塗布平板以檢查表面消毒是否徹底（無菌落生長）。將表面消毒後的根切成小段，植於PDA平板上，於28℃恆溫培養，每天觀察、記錄培養情況。待菌落長成後，重複取菌落邊緣部分進行轉接純化，再接到試管中保存。分離菌株的形態學觀察及鑑定可參照真菌鑑定手冊的分類標準和系統，主要觀察記錄菌落的特徵、產孢子結構和菌絲結構等，並用數碼顯微鏡拍照，進行初步鑑定。

【研究目標】

（1）確定一種蘭花內生菌根菌的分離方法。

（2）分離純化蘭花內生菌根菌並初步鑑定到屬。