一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養基是否混濁,然後,在鏡下觀察培養細胞生長的狀態,黑點是否遊動。如果細胞被汙染,微生物則會大量繁殖,培養基就會迅速變黃、變混濁。汙染包括細菌汙染、支原體汙染等。
如果在鏡下觀察細胞,生長狀態良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化,那麼,黑點的出現可能與以下幾種情況有關:
1.細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;
2.血清析出物,可能與保存化凍有關;
3.配製培養基的pH值偏高,不宜細胞生長;
4.配製培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;
5.培養原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。
細胞培養中如何防止黑點生成
1. 儘可能地減少血清凍融次數。
2. 培養基保持最佳PH值7.0- 7.2。
3. 嚴格控制配製培養基的水質,容器按要求清潔後是否確認清潔有效及去汙劑殘留。
4. 掌握細胞傳代的最佳時機,細胞切勿生長過老。