自己我進入實驗室開始,我聽到最多的就是,來來幫我看下,我的細胞好像又汙染了,該怎麼辦啊!藉此,今天我們討論下怎麼看細胞汙染了,汙染了該怎麼辦?我們不求全面分析,只對一些常見汙染進行診斷分析。
細菌汙染:這個是最容易區分的,培養液變黃,渾濁基本斷定細胞重度汙染,並且在顯微鏡下用40X物鏡你就能發現有那種可以動的小黑點。另外還有白色念球菌、葡萄球菌等等,發幾個案例:
看到這種,別猶豫了你的細胞被汙染了,那麼怎麼辦呢,基本原則立馬扔掉,別擴大汙染,如果你的細胞真的十分寶貴,先用帶有雙抗的PBS反覆衝洗幾遍,然後再培養液總加入硫酸慶大黴素、新黴素(50ug/ml)等,培養3天後換成帶有雙抗的培養液培養。
真菌汙染:比較常見的是黴菌汙染,這種汙染培養液依舊清亮,只是會發現細胞狀態下,並且可以在顯微鏡下發現有如下的菌絲存在。如果培養液中出現無來源的絲狀物,恭喜你中招了。有這樣的,
還有這樣的:
這種也是:
真菌汙染真的不建議處理,因為孢子容易飄散,可能這瓶沒9過來,又擴大了汙染,建議預防為主,在培養箱的水中加入硫酸銅,就是藍色的那種東西。哎,如果你非救不可,可以採用兩性黴素B(0.25-2.5),三天後換液加入含PS的培養液。
支原體汙染:這個可以說是最常見的,國產血清可能都存在這玩意,這種汙染很難發現,染個hochest你可以發現它的存在,因為它有DNA嗎。看圖:
對於這種汙染,難發現,一般如果你的細胞沒來由的就生長不好了,可以染個hochest看看哦。處理方法,一般用50℃處理就5h可以。另外你可以將細胞注射到小鼠腹腔弄死它,當然加巨噬細胞也可以,我估計你搞不定。
其實汙染的種類還有很多,為了讓你們看的不太累了,就搞這麼多咯。其實預防為主,在培養液中加入雙抗,生物安全櫃別放太多東西,進入生物安全櫃的東西要無菌。細胞培養箱加入硫酸銅。