啊,您的細胞又汙染了?小編教您幾招判斷細胞是哪種汙染。
狀態:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。
預防和補救:a,仔細檢查一下器皿的滅菌情況,是否在高壓滅菌時放氣時間和壓力足夠!尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品,連續兩次汙染的話有可能造成儲存液汙染,一定要檢查培養液是否存在渾濁的現象!
b,可在培養液或血清中加吉銳生物支原體預防劑。c,若細胞一旦汙染,建議加支原體清除劑能可以清除常見的革蘭氏陰性和陽性菌。
狀態:培養液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養2-3天,仍清亮,但出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之後,細胞的活力狀態變差。
預防和補救:a,預防黴菌汙染,可在培養基裡加支原體預防劑。
b,若細胞一旦汙染,建議捨棄該汙染細胞。
c,用吉銳生物Incubator Cleaner擦拭CO2孵箱內壁,水盤裡也加上1:500稀釋後的Tray Cleaner。或者在培養箱的託盤加入Incubator Cleaner,可以防止黴菌汙染。孵箱應定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節。
狀態:鏡下黑色,多為多形,培養液一般會渾濁,國內血清很多沒做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以後,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去。
預防和補救:a,預防支原體汙染,可在培養基裡加支原體預防劑(替代雙抗)。
b,若細胞一旦汙染,建議使用支原體清除劑,無任何不良反應。
狀態:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲遊來遊去,培養液不渾濁,一般不會太影響,細胞還可以用。常常可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。
預防和補救:黑蛟蟲對細胞生長狀態沒有明顯影響,在細胞增殖旺盛之後會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議細胞有可能是此種汙染的話,可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率。
狀態:一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,像珊瑚狀,不像細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。
預防和補救:真菌生長的比較慢,不像細菌那麼容易被發現,但是一旦有它的存在細胞也很難救活了。如果真菌感染,可用Cleaner將實驗室全部清潔一遍。
狀態:培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞佔優勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,最終形成惡性循環。
除以上汙染源外,配液消毒問題、操作問題也是汙染原因之一。關於培養基的無菌狀況,取培養基至培養瓶中(不加細胞),37度試培養一段時間後觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。
另外注意周圍環境汙染:
1、孵箱可定期用培養箱清除劑抑菌或水盤抑菌劑。
2、超淨臺\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素。
3、超淨臺的風機不能過大,風機到6-8格。否則也可能能致黴菌汙染。
4、無菌室經細胞房除菌劑消毒後,即可進入操作。
5、水浴鍋抑菌劑可以抑制水浴鍋,細菌真菌的生長,可以有效防止細胞的汙染。
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