支原體常規PCR檢測試劑盒操作詳解

2020-12-01 騰訊網

支原體常規PCR檢測試劑盒(一步法)

VenorGem OneStep

特點

1. 內控對照已加在預混液中，無需另外配置，使用便捷。

2.高特異性，僅一條陽性對照條帶，即可涵蓋所有可能感染細胞的支原體物種。

操作簡單，易於觀察。

3.高靈敏度，1-5拷貝/μl的支原體DNA即可檢出。

4.歐洲藥典要求的26種支原體均可檢出。該試劑盒可檢測出1種脲原體、7種

無膽甾原體和85種支原體。

操作步驟

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規PCR 檢測試劑盒 (一步法)( 貨號：11-8050) 為例，具體產品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理

第2步：試劑製備

第3步：PCR體系建立

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體汙染時，由於內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然後再檢測。

儲存條件

2~8℃至少12個月。復溶後必須在-18℃保存。

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  • 如何給細胞做支原體篩查？
    細胞培養是實驗室的常規操作和科研基礎。其中，保證細胞不受支原體的汙染是決定實驗成敗的重要環節。然而，支原體汙染細胞的發生率又非常高,有報導高達63%。那麼，這些支原體汙染是從哪裡來的呢？在支原體的各種檢測方法中，常規PCR法以其①靈敏度高，特異性好；
  • 科研人員為什麼不能忽視支原體汙染的存在？
    細胞培養中有幾種支原體汙染與人、牛和豬有關。實驗室的工作人員是口腔支原體、發酵支原體和人型支原體的主要來源。這三種支原體佔細胞培養中支原體汙染的一半以上，它們主要存在於人的口咽部。支原體也存在於人的頭髮、皮膚上。胰酶如果是豬來源的，那麼也可能存在豬鼻支原體。以下為支原體汙染的主要途徑。
  • PCR檢查支原體是對藥典方法的重要補充
    支原體是導致體外細胞汙染的重要汙染源。用於生物製品生產的細胞基質或治療性細胞。產品被支原體汙染後，支原體或支原體代謝產物可進入人體，並對人體產生嚴重危害。因此，對支原體汙染的有效檢測是確保細胞基質及治療性細胞產品質量的前提。