從以往PCR對支原體汙染的檢測報導看方法驗證的必要性

2020-11-12 DY締一生物

以PCR為代表的核酸擴增技術自1988年發明以來，已廣泛應用於科研和臨床，但用於生物製藥則較晚，這是因為標準化的建立需要一定的時間。

國外已有不少藥廠將PCR或qPCR用於工業放行檢測中的支原體檢查。PCR的靈敏度、特異性、適用性和可靠性具有達到藥典標準的潛在可能。但需要按步驟和程序開展方法驗證。

有作者指出，有些PCR法在反應條件及引物設計上，仍需不斷改良以提高其檢測效率。作者曾用半巢式PCR檢測70份支原體汙染的樣本（主要為生物製品生產用細胞基質），結果只檢出60份，說明PCR要應用於工業檢測支原體，其首要因素是要提高檢測限。見2015年《生物製品學雜誌》中的《中國生產用細胞基質汙染支原體類型的分析及豬鼻支原體特異性檢測方法的初步建立》。

需要指出的是，對於工業藥廠，如要採用PCR方法進行支原體汙染的檢查，如方法需要驗證，可使用minerva biolabs提供的現成的支原體標準品。如簡化驗證，可使用現成的已經過驗證的支原體PCR或qPCR檢測試劑盒。並且支原體DNA需要經過抽提才能進行檢測，以保證相應的靈敏度。


下面小編介紹一下商業試劑盒的特點：

1）使用靈活

* 與幾乎所有商用循環儀兼容

* 可選擇常規PCR或實時螢光定量PCR

2）高性能

* 高耐用性、高靈敏度和高特異性（>100種支原體物種可檢測）

* 符合EP 2.6.7 / USP <71> / JP G3標準。提供內部擴增對照，

用於過程監測。有產品驗證報告

3）使用方便

* 預先分裝PCR mix（25個反應），保證長期穩定性

* 組分為凍乾粉形式，使運輸與存儲更簡單

* 探針檢測，結果清晰（qPCR）

可考慮的標準品需要經過嚴格標定。需考慮有國際聲譽和質控報告的標準品廠家。下面介紹某廠家標準品類別如下：

配套用於過程驗證和檢測的標準品（EP2.6.7/USP<71>/JP G3）：

* 10CFU™靈敏度標準品，包括所有EP和JP列舉的支原體物種

* 100CFU™靈敏度標準品

* 支原體和細菌基因組DNA（特異性驗證用）

* PCR定量標準品（108拷貝DNA/管）

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