細胞培養中支原體檢測的重要性

2020-12-06 騰訊網

支原體是細胞外生存的最小微生物，是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之間，呈高度多形性，有球形、杆形、絲形、分枝狀等多種態。

1、支原體存在於我們周圍，他可能就如塵埃一樣存在於我們的環境中

2、可透過一般的濾膜，所以不要寄希望於過濾可以清楚支原體汙染的液體

支原體對培養細胞的汙染發生率高，據估計平均發生率在60%左右。同時又非常隱秘，早期不容易被發現，除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測試劑盒。支原體因為個頭小，能穿過0.22微米濾器，並且在實驗室內會潛在的擴散。支原體汙染使得用被汙染的細胞樣本做的實驗完全失去意義和價值。

那我們在做細胞培養時如何檢測支原體呢？

1. 支原體常規PCR檢測試劑盒（一步法）

用途說明：

1）適合科研單位檢測，或單位內檢，用PCR法檢測細胞或其他生物基質。

2) 比藥典操作標準合併了一步，（將內控對照試劑預先混合在PCR mix試劑中），操作更簡潔。

3)樣本量為2μl，靈敏度為20個基因組拷貝/反應。結果準確。

2.支原體常規PCR檢測試劑盒（經典法，不含Taq酶）

用途說明：

1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求，更適合細胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質檢。

2）樣本需先做DNA抽提。抽提後樣本加入量為10μl。

3）試劑盒中不含Taq酶，需另外購買。

4) 廠家可協助完善方法驗證步驟。

3. 支原體常規PCR檢測試劑盒（經典法，含Taq酶）

用途說明：

1) 符合歐洲藥典、中國藥典要求，更適合細胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項目申報和質檢。

2）樣本需先做DNA抽提。抽提後樣本加入量為10μl。

3）試劑盒中含Taq酶，無需另外購買。

4) 廠家可協助完善方法驗證步驟。

4. 支原體常規PCR檢測試劑盒（預分裝法）

用途說明：

1）適合科研單位檢測，或單位內檢，用PCR法檢測細胞或其他生物基質。

2) 比一步法更為方便。表現在：

PCR組分（包括酶、核苷酸、引物、內控對照，均為凍乾粉）和上樣緩衝液/染料已預先分裝在八連管中。

PCR結束後，產物直接上膠，不需再加上樣緩衝液和染料。

3)價格比一步法略高。適合想節省時間、追求簡易的用戶。

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