腎缺血再灌注損傷(RIRI)小鼠模型的建模方法

來源：缺血再灌注，雙側腎動脈夾閉法

模式動物品系：Balb/c小鼠，SPF級，雄性，周齡：4~6周，體重：20g~22g

實驗分組：隨機分組：對照組，模型組，陽性藥物組，受試藥物組(3個濃度梯度組)，15隻每組

實驗周期：24h、72h

建模方法：

1 選取20-22g左右小鼠，術前禁食12h，自由飲水。 2 3％戊巴比妥鈉(80mg/kg)腹腔注射麻醉,小鼠背部去毛，消毒備皮。 3 在背部脊椎旁0.5cm、肋骨下緣0.5cm處剪開皮膚及肌肉，可見到腎臟, 小心分離出兩側腎臟的腎動脈，迅速用動脈夾夾閉兩側腎動脈。 4 缺血45min後鬆開動脈夾，恢復血流，觀察腎臟恢復情況。 5 分兩層縫合開口,待小鼠清醒後，將其放回潔淨籠具後放回飼養室飼養，定期觀察小鼠狀態及死亡情況並做好記錄。 6 對照組不做缺血處理，其他操作相同。 7 分別取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六個時間點取材。麻醉小鼠，摘眼球取血，室溫靜置2h後於4℃3000r離心10分鐘提取血清，放入-80冰箱凍存。同時取左腎組織留作病理標本，右腎組織分生標本。

應用：可用於研究腎缺血再灌注損傷在臨床預防和治療中的作用

模型評價

1. 血清生化指標檢測： 取各時間點（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，檢測血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,評估腎功能。 2. 腎係數檢測: 摘取雙側腎臟後，生理鹽水衝洗，稱重計算腎係數。 腎係數=雙側腎重（mg）/體重（g） 3.腎小管壞死的評分: 每張切片×200 倍鏡下取外髓質部 10 個視野，按 0 = 正常，1 = 輕微損傷(受損腎小管< 5%)， 2= 輕度損傷(受損腎小管 5 %～25 %)， 3 = 中度損傷(受損腎小管 25 %～75 %) ， 4 = 重度損傷(受損腎小管> 75 %) 作半定量分析並計算其均值，作為腎小管壞死的評分指數。

組織病理學

4％多聚甲醛溶液固定48h。常規組織脫水、透明、浸蠟 、包埋。石蠟切片進行HE染色和PAS染色。 對照組小鼠腎小球、 腎小管及腎間質結構基本正常。在 模型組組， 隨著再灌注時間的延長呈現不同程度的腎臟病理改變， 可見腎小管上皮細胞渾濁腫脹，出現水樣或空泡變性，刷狀緣消失，部分腎小管上皮細胞凝固性壞死、脫落，腔內可見管型，並可見間質水腫，間質內灶性炎症細胞浸潤，腎小球病變不明顯。

標誌因子水平

ELISA 法檢測血清 TNF-α、IL-6 含量, 模型組小鼠血清 TNF- α 和 IL- 6 含量在各時間點均顯著高於對照組，其中24h為最顯著。