帕金森病(PD)小鼠模型的建模方法

來源：MPTP

模式動物品系：SPF級Balb/C小鼠，健康，雄性，4~6W，體重為18g~20g。

實驗分組：實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組。

實驗周期：4-6 weeks

建模方法：

模型建模方法：
腹腔注射MPTP 20mg／kg／d，連續注射14天。對照組使用等體積生理鹽水進行腹腔注射，操作及注意事項相同。MPTP給藥結束後，模型建立成功。
藥物給以相應的藥物處理；正常組、PD模型組使用等體積PBS進行腹腔注射，操作及注意事項相同。

應用：疾病模型

模型評價：

1.轉棒實驗：使用小鼠轉棒儀檢測小鼠的運動協調能力。
將小鼠置於直徑為3cm的旋轉杆上，轉速調整為30r/min，每次同時測定5隻小鼠，每個隔室中1隻。記錄小鼠從轉棒開始轉動至掉落轉棒所經歷的時間，測定時間為1min，每次中間休息1min，連續5 次，記錄1min 內掉落次數。
2.曠場實驗：即自發活動，是檢測MPTP損傷後少動的常用指標。
曠場實驗所用實驗箱為尺寸：500×500×300mm曠場，周壁的顏色為黑色，曠場底面被平均分為16個4×4 個小方格。正上方架攝像頭，視野覆蓋整個曠場。將動物放置在正中央格，同時進行攝像和計時，時間為5 min。通過計算機示蹤分析系統來分析動物在一定時間內的活動狀態。實驗室保持安靜，室溫為20 ℃左右，光線充足。觀察指標：方格間穿行次數（動物的四肢從一個格進入另一個格為穿行一次）、直立次數（動物雙前肢同時離地，或者雙前肢放在牆壁上算作直立一次）、中央格停留時間、穿過中央格的次數。
3.爬杆實驗：是評價小鼠運動協調能力的經典方法。通過記錄小鼠由杆的頂端往下爬到底部（雙前爪著地）所需時間，比較其運動能力。本實驗將小鼠放置於一個木製的粗糙的小球上，其下端接有一個表面粗糙、截面為圓形的木棒，木棒下端放置於鼠籠裡，當小鼠頭朝下方從木球爬至木棒上，用秒表記錄此刻的時間為 A，當其爬至木棒最下端時，記錄此刻的時間為 B，那麼小鼠爬完整個木棒所用的時間為 C，C=A-B，每隻小鼠測試倆次，將倆次爬杆的平均時間作為統計指標。

組織病理學：

1.腦組織尼氏體染色
取各組小鼠腦組織，經固定液固定、石蠟包埋、切片後，進行尼氏小體染色。觀察各組動物腦組織中尼氏小體的數量。
2. 免疫組化檢測腦黑質TH表達
取各組小鼠腦組織切片，修片至腦黑質部位，進行免疫組化染色酪氨酸羥化酶的表達。
3.電鏡檢測腦部線粒體：電鏡下觀察小鼠腦部多巴胺能神經元細胞超微結構。低倍視野有基本完整的細胞結構，高倍視野中要有線粒體線粒體特寫， MPP組可見鐵死亡線粒體：大小變小，雙層膜密度增高，外膜斷裂，脊減少或消失。