免疫組為什麼用一抗又要用二抗

免疫螢光標記為什麼不能直接標記一抗而標記二抗

一抗只識別一種底物，如果每種一抗都需要螢光標記，那這樣成本很高。而二抗既可以和一抗的結合，又帶有可以被檢測出的標記（如帶螢光、放射性、化學發光或顯色基團），作用是檢測一抗，提高了通用性。一抗是針對抗原的抗體，二抗是針對一抗的抗體，即抗體也可以充當抗原刺激機體產生抗體。一抗二抗都是一種可以特異結合別的物質的基團，而且一抗可以至少結合兩種其他基團（底物和二抗）。特點是：特異性強、敏感性高、速度快。

免疫組化的二抗還有區別的麼!要怎麼選

免疫組化大家基本上都做過，你知道有二抗，也應該知道免疫組化的原理就是一抗結合到目標蛋白，再有二抗來進行信號放大，大概是這樣：但是你知道二抗的信號放大實際上有多種方法……這就需要你進行二抗標記方法的選擇，最簡單的二抗標記方法是直接法：

來源：ChemicalBook背景及概述[1][2]背景[1-7]高效免疫組化二抗試劑盒基於聚合物技術的最新一代免疫組化二抗非生物素檢測系統，與傳統的免疫組化二抗試劑盒相比，具有以下特點：1.信號更強、操作更加簡單，可有效減少一抗使用量，一抗試劑可再稀釋2-4倍，節省實驗成本；2.避免生物素的使用，從而避免由生物素引起的非特異性背景顯色，顯色更清晰，背景更乾淨；3.快速更短的試劑孵育時間，節省時間成本；免疫組化（IHC）是利用抗原與抗體的特異性結合原理和特殊的標記技術

上海恆遠解析什麼是一抗?什麼是二抗?

大家都知道抗體有一抗跟二抗之分(二抗就是多抗)，那麼到底什麼是一抗，什麼是二抗，其中又有什麼區別呢?且看上海恆遠來分您一一分析：　　一抗的作用:可以特異結合底物，就是識別出我們想要檢測的東西。　　二抗：二抗是在其它宿主體內製備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，上面通常連有酶或螢光素等標籤。

人源血清學檢測:抗人二抗

這些檢測在臨床決策中起著至關重要的作用，免疫分析是目前可用的強大，靈敏的血清學檢測方法之一，它基於抗原抗體之間的高度特異性結合，即使在低濃度下也能進行定性和定量檢測。有多種免疫測定方法，以下是其中常見兩種檢測方法示意圖，分別是夾心法（圖1A）和直接法（圖1B），當選擇用於夾心法檢測的抗人二抗時（圖1A），需要考慮一抗的種屬，並使用與該物種有最小交叉反應的二抗。

抗體-二抗的選擇難道真的只有那麼簡單?

二抗針對某一特定物種（如小鼠）的所有抗體均具有特異性，因而使用標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記，大大節省了時間和費用；此外，一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實驗靈敏度。

DyLight 螢光二抗特點如何？

DyLight 594（A23430）螢光二抗，兔抗山羊，該抗體與山羊IgG全分子反應。它也與山羊IgG的重鏈，以及山羊其它免疫球蛋白的輕鏈發生反應。它對非免疫球蛋白的血清蛋白沒有反應性。但它可能與其它物種的免疫球蛋白有潛在的交叉反應。

HRP標記親和純化山羊抗人IgG二抗,與Fcγ片段特異性反應

作為免疫學實驗不可或缺的工具，二抗是指用於靶向結合一抗的抗體在WB、ELISA免疫螢光等免疫實驗中，二抗經常和一抗結合使用通過信號放大作用以檢測目標蛋白。很多二抗都帶有標記物，例如最常見的辣根過氧化物酶（HRP），從而使二抗的信號可以被檢測到。其中抗人二抗是開發高通量血清學免疫檢測試劑盒的關鍵試劑，所以抗人二抗的質量是開發免疫測定試劑盒時的關鍵考慮因素。

HRP標記山羊抗兔二抗,多文章發表!

在免疫學實驗中，比如WB，IHC，IF等，大家都知道選著好正確的一抗，往往實驗就成功了一大半，因此，往往很多研究者便會忽視對二抗，以及其它試劑盒品質的追求。二抗是一種相對而言比較穩定的產品，包裝大，因此很多實驗室都會公用一個二抗。但如果二抗沒有選擇好的話，影響的可能就是一整個實驗室或者課題組了。

免疫組化技術——典型實驗案例學習

這可通過縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是最重要的一條。2、一抗用多克隆抗體易出現非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。這方面我有教訓的，我做胎鼠睪丸間質細胞鑑定，用1：200一抗效果很好；但我用1：200一抗孵育成年睪丸間質細胞檢測，幾乎呈陰性，後來證實是因為兩者抗原含量相差甚遠，則一抗也要適當提高濃度。2、其次，檢查抗體有無選擇錯誤和抗體孵育條件是否不適。

新手細胞免疫螢光實驗常見問題解答

一抗二抗的孵育條件和Western blot實驗中大致相同，可以選擇室溫、4℃和37℃孵育一抗。不過大多數人還是習慣於4℃放置溼盒內孵育過夜，抗原抗體緩慢結合可以避免非特異性染色。但是如果選擇4℃孵育過夜，一定要先恢復至室溫後再用PBS清洗一抗，如果馬上清洗很容易造成脫片。

關於免疫沉澱,這裡介紹地很詳細!

（不要問小編為什麼要超聲步驟，小編回答是6個字：為了實驗成功）☆ 目的蛋白富集關於酸性洗脫和煮沸法選擇：酸性洗脫適合於所有大小蛋白的洗脫，且背景更乾淨；煮沸法因可能會將Beads上少量protein A/G煮脫下來，一般不建議用於＜50

免疫螢光染色技術您知多少?

一、直接免疫螢光染色基本原理：已知抗體+螢光素=特異性螢光抗體。染色時：螢光抗體與載玻片上組織中的抗原結合，在螢光顯微鏡下即可觀察到目標抗原。二、間接免疫螢光染色基本原理：特異性的一抗與細胞表面的抗原結合後

Western Blot(WB)蛋白免疫印跡基本原理及FAQ | RIP專題

轉移後的 NC 膜就稱為一個印跡（blot），用蛋白溶液（如 5%BSA 或脫脂奶粉溶液）處理，封閉 NC 膜上的疏水結合位點。用目標蛋白的抗體（一抗）處理 NC 膜——只有待研究的蛋白質才能與一抗特異結合形成抗原抗體複合物，這樣清洗除去未結合的一抗後，只有在目標蛋白的位置上結合著一抗。

免疫組化方法中關鍵環節及其原理概述

7、血清封閉：組織切片上有剩餘的位點可以與一抗非特異性結合，造成後續結果的假陽性；封閉血清一般是和二抗同一來源的，血清中動物自身的抗體，預先能和組織中有交叉反應的位點發生結合；也可以用小牛血清、BSA、羊血清等，但不能與一抗來源一致。一般室溫或37度10-30min。8、一抗和二抗濃度和孵育時間：一抗孵育條件在免疫組化反應中最重要，包括孵育時間和抗體濃度。

多重免疫螢光染色,發4-10分論文的利器!

在原理上，IF多染依舊是利用帶有螢光基團的一抗/二抗與抗原直接/間接的結合，再通過螢光顯微鏡鏡檢。IF多染的變化僅僅是在IF單染的抗體配置步驟上多出了等體積混合不同的一抗與等體積混合不同的二抗兩個步驟，即一抗A與一體B的工作液等體積混合，二抗C與二抗D的工作液等體積混合。

免疫螢光（IF）不再是難題！正常驢血清解決方案

經常有小夥伴對於免疫螢光（IF）的諸多問題不知所措，下面是一些免疫螢光（IF）的常見問題及優化方案詳細解答，給受困於免疫螢光（IF）的同胞們謀個福利~8.二抗選擇錯誤優化方案（與以上原因相對應）：1.製備細胞裂解液，用Western Blotting驗證目標蛋白在細胞中是否表達2.標本中使用更多的細胞，試用其他瞬時轉染方法，或者使用穩定轉染細胞系3.增加通透劑作用的時間或者濃度，或改用其它的通透劑4.改用其他固定方法5.減少通透劑作用的時間或強度

貼壁細胞免疫螢光染色

免疫螢光染色實驗是細胞生物學中檢測蛋白表達的常見方法，如何做好免疫螢光染色實驗尤為重要。1. 細胞爬片免疫螢光實驗用到的原理是抗原與抗體特異性結合。因此為了便於操作，通常將細胞接種在蓋玻片上。而細胞很難在蓋玻片上生長，所以在開始實驗前要將蓋玻片以多聚賴氨酸包被。將蓋玻片浸泡在消毒酒精中過夜，鑷子夾取一片蓋玻片並在酒精燈旁烘乾，待其冷卻後放入六孔板。以免溫度過高導致六孔板底部融化。加入多聚賴氨酸溶液，以覆蓋蓋玻片為準，避光孵育30分鐘以上，然後吸去液體，風乾以備用。

細胞免疫螢光技術原理入門分享

師姐：小白，明天我帶你做個免疫螢光實驗吧！小白：好的，師姐。小白的內心獨白：免疫螢光是什麼？咱也不敢問，咱也不敢說，還是先上網查查吧本文將從是什麼，為什麼，怎麼做三部分進行講解。一、是什麼？吸乾液體，隨後在細胞上覆蓋一層 2–3 mm 用溫熱 PBS 稀釋的 4% 甲醛。註：甲醛有毒性，僅限通風櫥中使用。室溫下固定細胞 15 分鐘。吸乾固定液，用 1X PBS 漂洗三次，每次 5 分鐘。繼續進行免疫染色操作（C 部分）。II. 冰凍/低溫切片 (IF-F)冰凍固定組織進行免疫染色（C 部分）。

免疫螢光可以避開的「坑」

總是會看到人家提取的細胞，拍的漂漂亮亮的圖片，在面前晃，然而，輪到自己，發現並不是準備細胞—固定細胞—細胞通透—封閉—上一抗—上二抗-染核-鏡檢這麼簡單，後來發現，不要50個字都可以形容出來的實驗步鄹，卻這麼難。。。五點建議讓你避開免疫螢光的坑，美美的show一把自己的成果，也對的起因為實驗掉的大把的頭髮了。