蛋白質二維電泳技術原理簡介

2021-01-08 中國教育裝備採購網

二維聚丙烯醯胺凝膠電泳技術結合了等電聚焦技術（根據蛋白質等電點進行分離）以及SDS－聚丙烯醯胺凝膠電泳技術（根據蛋白質的大小進行分離）。這兩項技術結合形成的二維電泳是分離分析蛋白質最有效的一種電泳手段。

通常第一維電泳是等電聚焦，在細管中（φ1～3 mm）中加入含有兩性電解質、8M的脲以及非離子型去汙劑的聚丙烯醯胺凝膠進行等電聚焦，變性的蛋白質根據其等電點的不同進行分離。而後將凝膠從管中取出，用含有SDS的緩衝液處理30 min，使SDS與蛋白質充分結合。

將處理過的凝膠條放在SDS－聚丙烯醯胺凝膠電泳濃縮膠上，加入丙烯醯胺溶液或熔化的瓊脂糖溶液使其固定並與濃縮膠連接。在第二維電泳過程中，結合SDS的蛋白質從等電聚焦凝膠中進入SDS－聚丙烯醯胺凝膠，在濃縮膠中被濃縮，在分離膠中依據其分子量大小被分離。

對細胞提取液進行雙向電泳時可分辨出1000～2000個蛋白分子，也有報導說能夠分辨出5000～10000個蛋白斑點。這些報導的數據與細胞中正常存在的蛋白分子的數量很接近，因此可以說蛋白質雙向電泳的解析度較高，可以直接用於檢測細胞提取物中單個蛋白分子。

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