漏膠及汙染同位素的危險性增大。
2.若使用雙鏈探針，在100C加熱3p標記的雙鏈DNA 5min,使之變性，然後迅速移至冰水中冷卻。
此外，可以加入0.1倍體積的3mol/L NaOH變性探針。室溫下Smin後，將探針移至冰水中，加入0.05倍體積的1mol/L Tris-Cl (pH72)和0.1倍體積3mo/L HCI,冰水放置直到使用。單鏈探針不需變性。
3.把變性的或單鏈放射性標記的探針直接加到預雜交液中，在合適的溫度下繼續溫育12~ 16h。為了檢測低豐度mRNA,需使用至少0.1μg特異活性超過2X 10°cpm/ug的探針。
當探針與靶基因非同源時，即低嚴謹性雜交，最好在較低的溫度(37~42C)下進行雜交，雜交緩衝液含有50%去離子化甲醯胺、0.25mol/L 磷酸鈉(pH7.2)、0.25mol/L NaCl和79%SDS。
探針與固定於固體支持物上的核酸雜交的具體條件請參閱第2章，方案1~13.4.雜交後，將膜從塑膠袋中取出，在室溫下迅速轉移到含有100~ 200mL 1X SSC。
0.1%SDS的塑料盒內，將盒蓋好，置於水平振蕩器上，溫和振蕩10min。
▲在洗染步驟中，任何時候都不要讓膜乾燥。如果使用單鏈探針，將洗滌液中的SDS濃度增至1%。
在會甲醯胺的緩衝液中低嚴謹性雜交之後，23C下用2XSSC衝洗膜，然後23C下用2XSSC, 0.5XSSC 和0.1xSSC 含0.1% SDS的洗液分別洗膜1Smin,最後50C下用會1% SDS得0.1XSSC洗膜。