來源：www.bioon.com 2006-12-17 01:46
白芍為毛賈科芍藥Ynenniula cuf oraP all.的乾燥根。藥材主產浙江、安徽、四川等地，此外，河南、貴州、山東等地也有栽培lil。其味苦、酸，微寒.歸肝、脾經。具有平肝止痛.養血調經，斂陰出汗之功能Cz;據報導，白芍根主要含有芍藥昔、芍藥內酚普、輕基芍藥普、苯甲Wt芍藥普和苯甲酞輕基芍藥昔等昔類成分。，多用芍藥昔單一成分作為白芍的質控指標，難於全面的控制白芍的內在質量，不能對其真偽優劣做出判斷。本實驗通過用RP-HPLC方法建立白芍的指紋圖譜，並將聚類分析和相似度分析的數據分析技術應用於白芍的指紋圖譜，考察了白芍藥材與產地及炮製之間的數據關係為全面控制白芍的質量提供了方法
1 儀器與試藥
日本島津公司LC一LOAD液相色譜儀，SPD一10A檢測器，C一R6A數據理機1甲醇、乙睛為色譜純，雙蒸水，其他試劑均為分析純。
白芍藥材均由瀋陽藥科大學孫啟時教授進行鑑定，來源見表1（略）
2 實驗方法和結果
2.1 對照品溶液的製備：精密稱取芍藥普對照品適量，用甲醇配製成。25 mg/ml的溶液。
2.2 供試品溶液的製備
2.2.1 提取方法的考察
本實驗對甲醇,95%乙醇索氏提取，甲醇,95%乙醇、丙酮-水(7:3) 回流提取，對提取溶劑、提取方法進行了考察。結果表明，乙醇回流提取後所得色譜峰的峰數為最多。後又對50%,75%,95%乙醇回流提取進行試驗，發現三者之間峰數無顯著性變化，本實驗採用50%乙醇作為提取溶劑進行回流提取.
2.2.2 樣品溶液的製備
精密稱取白芍粉未1.09g加人50%乙醇10 mL回流提取3次，每次2 h,濾過，合井各濾液，旋轉蒸發回收溶劑，殘渣用甲醇溶解並定容置10 ML量瓶中，搖勻。再精密量取0.5 mL置5 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜過濾，取續濾液備用。
2.3 檢測波長的選擇
取樣品溶液，分別在210,230,254,282nm處檢測。結果表明，254,282 nm處各色潛峰之間分離度好，但峰數少;210nm檢測，蜂數與230 nm檢測基本致，但基線不穩定，不能準確積分;以230。檢測，峰數多，基線平穩，故選之。
2.4 色譜條件
HypersilC C18( 4.6mm×200mm,5um)，大連依利特科學儀器有限公司生產;流動相為乙腈-水(1288,H,PO,調pH二3.0);流速0.8 ml."miri};檢測波長230nm，柱溫為室溫。
2.5 系統適用性試驗
理論塔板數以芍藥背計算不得低於5000，該峰與相鄰色譜峰的分離度不得低於1.2。
2.6 精密度試驗
精密稱取18號樣品，按供試品溶液製備方法製備供試品，連續進樣5次，記錄指紋圖譜結果表明，各色譜峰的相對保留時間和其相對峰面積比值基本致(RSD為。3%～2.8%)、符合指紋圖譜要求，精密 稱 取 18號樣品5份，按供試品溶液製備方法製備供試品，記錄指紋圖譜。結果表明，各色潛峰的相對保留時間和其相對峰面積比值基本一致(RSD)1.2%～4.3%)，符合指紋圖譜要求。
2.7 樣品穩定性考察
精密稱取18號樣品，按供試品溶液製備方法製備供試品，分別在。,2,4,8,16,24 h，記錄指紋圖譜。結果表明，各色譜峰的相對保留時間和其相對峰面積比值基本一致(RSD為0.8%一3.2%)，符合指紋圖譜要求
2.8 自芍的指紋圖譜測定了28個白芍樣品，共獲得21個色譜峰。
2.9 白芍樣品相似度分析
指紋圖譜反映的是樣品整體的特徵.進行指紋圖譜比較，可以反映樣品之間的親疏程度，但是單純的直觀比較指紋圖譜的峰的多少和峰的大小，只是定性比較，而且又帶有個人的主觀性。相似度可以定量的描述指紋圖譜，本研究用相似度分析對樣品進行了比較，可以定量的、客觀的對樣品進行評價。首先對28個白芍樣品進行聚類分析，採用離差平方和(Ward,5)法，利用歐氏距離(Eudid-)作為樣品的聚類依據以峰面積為樣品譜圖的特徵值，將樣品分為3類。分類結果見表20結合 生 藥 學鑑定結果，並參考中國藥品生物製品檢定所的標準藥材，從28個白芍藥材中選取10個有代表性的合格藥材(N,1 ,17 ,7,8,11,18,25,20,21,2)，取各樣品中21個色譜峰峰面積的平均值作為共有模式，然後計算樣品與共有模式之間的相似度，來判斷樣品質量。本研究以夾角餘弦、相關係數和歐氏距離作為測度，分別計算各樣品的相似度，結果見表3（略）。
3 討論
3.1 本實驗過程中，選擇了多種流動相系統:①甲醇一水(H3P04調至不同pH);② 甲醇一乙睛一水(H3P04調至不同pH);③乙臘一水(H3P04調至不同pH) ;④乙腈一水一四氫峽喃(H3P04調至不同pH)。結果表明流動相以乙臘一水(H3P04調至州3.0)系統為最佳，各色譜峰分離度較好，保留時間適中。
3.2 白芍中芍藥昔的含量最高，因此，建立門芍指紋圖譜時，發現供試品的濃度對指紋圖譜中特徵峰數目影響較大，
必須具有相當的濃度，才能檢側到指紋圖譜中峰面積小的特徵峰，否則就只能觀察到幾個主要峰，失去指紋圖譜的意義
3.3 目前，中藥材的鑑別和分類很大程度卜還依賴於經驗和表觀分析，也缺乏從分析數據中獲取評價依據的統一、使用的方法，採用本文的方法，可以快速獲得不同樣品間的相似性，進而利用聚類分析等方法對樣品進行歸類和鑑別。另外，在已建立標準指紋圖譜的基礎上可用相似度評價待測樣品與用合格藥材建立的共有模式指紋圖譜之間的相似程度，在一定程度上反映了所測樣品與合格樣品的偏離程度，但是中藥質量的評價仍需用代表臨床藥效的藥理實驗驗證因此，如果結合白芍的藥效物質基礎和藥理學研究，白芍的質量控制會更加完善和科學。
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