» 山東產金銀花乙醇提取物HPLC及NMR指紋圖譜的比較
來源：www.bioon.com 2006-12-17 01:46
[摘要]目的：研究山東產金銀花乙醇提取物的指紋圖譜。方法：採用光譜學及色譜學方法，確定醇提取活性成分的HPLC和NMR的特徵吸收圖譜。結果：醇提取活性成分有專屬的特徵吸收圖譜，重現性好。結論：綜合對照上述指紋圖譜，可用於金銀花中藥材的質量控制，也可用於其複方製劑質量的參考標準。
[關鍵詞]金銀花；指紋圖譜；HPLC；NMR
金銀花Flos lonicerae japonicae 又名忍冬花，為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的乾燥花蕾或帶初開的花，夏初花開放前採收，乾燥。藥理作用研究表明，金銀花具有抗菌、抗病毒、解熱、抗炎、保肝、止血、抗氧化、免疫調節等作用。由於受採集季節、採集部位及加工炮製方法的不同，其活性成分的種類及含量有所不同，因此有必要建立其指紋圖譜，用作單味中藥材及其配伍後複方製劑的質量控制。筆者採用高效液相色譜及核磁共振的方法，對山東產金銀花乙醇提取物活性成分進行系統研究，建立了其特徵吸收圖譜。
1 儀器與試藥
1.1 藥材與試劑 金銀花購自山東蒙山，由山東中醫藥大學中藥學院鑑定；甲醇為色譜純；磷酸、乙醇為分析純；蒸餾水，DMSO（氘代試劑），綠原酸對照品（購自中國藥品生物製品檢驗所）。
1.2 儀器 超聲波藥品處理機（濟寧科特超聲電子有限責任公司），Waters 高效液相色譜儀996 二極體陣列檢測器，Varian INOVA 600型超導傅立葉變換核磁共振波譜儀，METTLER TOLEDO 電子分析天平(梅特勒- 託利多儀器有限公司)，粉碎機(河北省黃驊市振興機電儀器廠) 。
2 方法
2.1 提取分離 準確稱取金銀花5g，加85%乙醇100mL，在150W 超聲震蕩提取30min，過濾，加蒸餾水定容至150mL，混勻，作為待測溶液。
2.2 HPLC 色譜法分析 色譜柱HYPERSIL ODS-2(250mm×4.6mm，5μm)，檢測波長：254nm，柱溫：室溫，流動相：A液為甲醇，B液為0.55% 磷酸水溶液，進樣量：10μL，綠原酸t R=16.3min。
2.3 含量測定 用上述待測溶液進樣，在上述色譜條件下得到色譜圖。以峰面積按外標法計算綠原酸的含量。
2.4 NMR法分析 將上述待測溶液抽乾成粉末，用Varian INOVA 600型超導傅立葉變換核磁共振波譜儀在25℃測定，掃描次數為16次，DMSO-d6 作溶劑。
3 結果
3.1 HPLC 色譜結果 待測溶液在上述條件下測定，得到HPLC色譜圖。
3.2 NMR 法結果 待測樣品按上述方法掃描，得到HNMR 譜圖。比較4 個批次的圖譜，解析發現它們相似度很高，化學位移和峰型均可很好地吻合，解析後得到共有特徵峰，以化學位移表示：7.39±0.02，7.03，6.96，6.75，6.13±0.05，5.05±0.06，3.91±0.05，3.56±0.02，2.00±0.03，1.94±0.01，1.77±0.03。
將待測樣品按上述方法掃描，得到CNMR譜圖。比較4個批次的圖譜，解析發現它們相似度也很高，化學位移和峰型也都可很好地吻合，解析後得到共有特徵峰，以化學位移表示：36.19±0.2，37.22±0.15，68.02±0.20，70.33±0.01，70.92±0.3，73.46±0.3，114.30±0.26，114.80±0.05，115.77±0.1，121.42±0.08，125.62，145.00±0.01，
145.59±0.1，148.38±0.07，165.76±0.28，174.98±0.31。
4 討論
4.1 從HPLC 色譜圖中可見乙醇提取物中有多種成分，採用綠原酸標準加入法，結果綠原酸峰面積成比例增加，說明該峰即為金銀花中主要活性成分綠原酸的吸收峰。
4.2實驗中藥材和中間體的核磁共振指紋圖譜均有很好的重現性，相似度達到90%以上。通過比較和分析具代表意義的共有峰，可以判斷藥材優劣。核磁共振指紋法作為檢測手段是能夠很好的表徵中成藥內在化學成分特徵及相對之間含量的差異。它的可靠性是無容置疑的，可以預言，隨著核磁共振指紋法的深入研究，必將在中藥現代化，中藥走出國門等方面發揮重要作用。
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