實驗專欄丨手把手教你質粒轉染

2021-03-01 中洪博元醫學實驗幫

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細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染（永久轉染）兩大類。本實驗室主要是質粒轉染、miRcroRNA轉染、慢病毒轉染、藥物轉染、多肽轉染等。

六孔板、CO2培養箱、EP管、酒精燈等；無血清培養基、MEM-α或DMEM、CO2培養箱、EP管、質粒、細胞等

1當六孔板中細胞密度達90％時，準備轉染，將無血清培養基、MEM-α或DMEM取出復溫並注意平衡好（以六孔板為例，其他孔板都可以按照說明書進行）；

2取出細胞，將培養基換成無血清培養基，放回孵箱培養；

3取滅菌的EP管，按要求混好質粒（約4ug/孔），每管250uL  DMEM，混勻；

4另取EP管，加入lipofectamine 2000（5 uL/孔）和MEM-α或DMEM（250uL/孔），輕輕混勻後室溫靜置5min；

5將上述兩個EP管混勻；

6室溫靜置20min，將lipofectamine 2000-質粒混合液滴到六孔板中，500uL/孔；

7將細胞放回孵箱培養，4h後換回含血清的完全培養基。

1、Lipofectamine 2000要求細胞鋪板密度較高，以90%-95%為佳，這有助於減少陽離子脂質體細胞毒性造成的影響。

2、Lipofectamine 2000可用於有血清培養基的轉染，並且轉染前後不需要換培養基，使得操作方便了許多，但是要注意製備轉染複合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑，因為血清會影響複合物的形成。複合物形成後是可以加入血清。這裡要特別注意檢測所用的無血清培養基是否能和Lipofectamine 2000匹配，比如已知CD293, SFM II，VP-SFM就不行。

3、如果你研究的基因要求比較長的表達時間，比如細胞周期相關基因，或者時細胞表面蛋白，最好選擇細胞鋪板密較低的轉染試劑，不適合用Lipofectamine 2000。

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