PAGE膠電泳DNA條帶回收:常規凝膠回收試劑盒一樣行!

2020-12-01 生物谷

    用常規的凝膠回收試劑盒（Gel Extraction Kit）來回收瓊脂糖凝膠電泳裡的DNA條帶可謂最簡便易行的實驗室操作之一。只要割膠，加入溶膠Buffer保溫溶膠，上柱離心，清洗一次，最後洗脫就可以了。不過如果實驗偶爾需要跑聚丙烯醯胺PAGE膠，回收DNA可就麻煩多了。電洗脫？要多麻煩就有多麻煩，回收率還低----PAGE上樣量本來就不能多加，否則解析度會降低，量少再加上回收率低做起來就更加不划算。本來好幾年前生物通就介紹過一個以色列公司的Geba小管子可以專門對付PAGE膠電泳，用的是電洗脫的原理，能令操作容易得率提高，不過還是需要耗時甚久。加上這以色列公司已經幾經轉手，負責銷售此產品的基因有限公司的員工顯然也不太熟悉這可愛的小東西，每每出現一問三不知的情況，使得購買相當不方便。

    實驗人員的智慧是無窮的。一眾Qiagen的擁躉們在「享受」了QiaQuick Gel Extraction Kit的暢快使用感後，等來等去又等不到廠家推出PAGE膠專用的試劑盒，於是開始自行摸索用這個瓊脂糖凝膠回收試劑盒來回收PAGE膠裡的DNA條帶，並將成功的方法反饋給Qiagen，於是Qiagen公司發布了User-Developed Protocol，雖然Qiagen說並未經最嚴格的徹底驗證和優化，不過既然聲譽卓著的廠家肯公開發布，毫無疑問已經證實是可行的了。生物通小編在這裡特別推薦給大家，從此，你可以用常規的膠回收試劑盒來對付PAGE膠裡的DNA條帶，而不需另外購買一個Kit或者苦惱其他複雜的方法啦。

自配溶液：diffusion buffer: 0.5 M ammonium acetate; 10 mM magnesium acetate; 1 mM EDTA, pH 8.0; 0.1% SDS.

操作流程：

1. 割膠，越小越好。

2. 溶膠：加入1-2倍體積的自配diffusion buffer（100ul-200ul vs. 100mg PAGE膠條），50°保溫30分鐘。

3. 離心取上清，小心除去未溶膠碎片，最好能過一個帶過濾膜的小柱或者過濾針頭。

4. 估計上清的體積，加入3倍體積的溶膠Buffer（試劑盒提供的）混合，確認溶液pH指示劑依然顯黃色,如果變色為橙或紫色，可補加10ul 3M醋酸鈉（pH5.0）至指示劑顏色轉黃(pH<7.5)。

5. 離心過柱，PE清洗一次，棄去廢液後再多離心一次。最後加洗脫液於濾柱的膜上，停留1分鐘後離心得到要回收DNA片段的溶液。

    相比瓊脂糖凝膠回收的步驟，這個方法其實只是前面多了一步，用自配的diffusion buffer溶膠，時間長一些，再混合試劑盒提供的Buffer，後面的步驟基本一致了。這樣，再不用為PAGE凝膠回收而苦惱，也不需要另外專門購買其他的試劑盒。真方便。鑑於各品牌的凝膠回收試劑盒原理相似，這個方法其他品牌估計也是能通用的。怎麼樣，你也試試吧！

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