Doctor. D小講堂 | 免疫沉澱實驗2大誤區

2021-01-18 賽默飛生命科學
免疫沉澱，簡稱IP，其實本質上也是一種抗原-抗體反應，將需要分離的蛋白樣本作為抗原，加入特異性抗體形成複合物，再加入載體進行純化。


免疫沉澱最早採用放射性物質標記，此後普遍使用的是瓊脂糖固相離心法，導致大家對免疫沉澱實驗產生很多固有印象。


今天的小講堂，小編就要打破固有印象，為大家講解免疫沉澱中的2大誤區。


誤區1：背景不可能避免？


免疫沉澱實驗中的背景產生主要有2個原因：

● 當使用瓊脂糖固相分離時，每次離心之後移除washing buffer時，可能會留下一部分含有雜質蛋白的buffer，導致背景升高。

● 瓊指糖固相介質為海綿狀，會有一些雜質蛋白留在介質空隙，導致背景升高



Dynabeads磁珠可以幫你解決這個問題！


● 通過磁力架吸附住磁珠，可以幫你完全去除buffer，顯著降低背景。

● Dynabeads磁珠表面光滑，避免雜質蛋白殘留。



誤區2：必須進行預清洗？


免疫沉澱實驗中，總有雜質蛋白會非特異性地連接到瓊脂糖固相上，出現假陽性。為去除這種非特異性結合蛋白，通常會對樣本進行預清洗。

1.不加任何抗體，先在樣本中添加瓊脂糖固相。雜質蛋白會非特異性地連接到瓊脂糖固相上，在移除瓊脂糖固相的同時被去除。


2.再加入抗體和瓊脂糖固相，此時不會有非特異性蛋白結合在瓊脂糖固相上。



Dynabeads磁珠可以幫你節省時間和成本！


第一步添加抗體，

第二步添加磁珠，

第三步洗脫。

Dynabeads磁珠能極大降低非特異性蛋白的結合



近年來越來越多的發表文章，都使用磁珠法進行免疫沉澱。與使用傳統瓊脂糖或其他瓊脂糖樹脂進行目標蛋白捕獲相比，磁珠法已成為免疫沉澱的金標準。


 

低背景——幾乎沒有非特異性結合，無需預純化即可獲得高純度蛋白質產量

高重現性——均一磁珠可確保高度一致結果

高靈敏性——（可）用於低豐度蛋白的敏感型應用，如ChIP和IP

快速簡單——可在40分鐘內完成，無需離心和預純化步驟 

節省抗體——所有結合均發生於磁珠光滑的外表面，可節約珍貴抗體，經濟有效

靈活——產品覆蓋IP、Co-IP、pull-down和ChIP分析；適用於手動和自動化方案

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