免疫共沉澱實驗怎麼做?

2021-02-12 中源生物

      免疫共沉澱是利用抗原和抗體的特異性結合來確定兩種蛋白質在細胞內相互作用的一種有效方法。細胞內蛋白質存在形式如下圖所示：

那麼CO-IP實驗怎麼做呢？首先目標蛋白在細胞中，因此第一件事就是裂解細胞，選擇細胞裂解液的原則是什麼呢？充分裂解細胞的同時並且不破壞蛋白複合體結構：

得到細胞裂解液後，此時需要派兵去抓其中的一個蛋白。方法是派出「特警Y」尋找「嫌疑犯A」，這個特警就是特異性很高的抗體，用抗體捕獲目標蛋白：

最終目標蛋白被抗體警察捕捉到，此時抗體及目標蛋白均在細胞裂解液中，為了後續的研究，需要把抗體抗原複合物從溶液中「拖」出來呢？如何實現這個過程呢？可以利用Protein A特異結合抗體的性質，把Protein A固定在一個質量很大的分子上，如磁珠或者瓊脂糖珠，也就是很多小夥伴說的Beads。

瓊脂糖珠採用離心的方法進行收集，磁珠方法利用磁力架進行吸附收集，磁珠方法對整個複合物機械損傷小，且方便快捷，越來越受到廣大科研愛好者的歡迎。此時已經拿到了目標蛋白，最後需要進行目標蛋白的分析：

最終得到兩個蛋白可能存在相互作用的結論，整個實驗過程如下圖所示：

免疫共沉澱實驗看起來也沒想像的那麼難吧！您get到點了麼？GE生命科學在層析領域的多年經驗及高性能多元化產品在免疫沉澱實驗中受到廣泛認可，GE提供高品質的Protein A磁珠和瓊脂糖珠以及全套Western實驗所需用品如高品質的ECL顯色試劑盒和PVDF膜等：

好了，今天的免疫共沉澱就說到這裡，歡迎小夥伴們留言。最後留下一道思考題考考各位！

問：在免疫共沉澱實驗中，當兩個蛋白在疏水區存在結合的時候，請問應該選擇以下哪種細胞裂解液？

     A:   NP40裂解液      B:  Chaps裂解液

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