如何給我們的細胞做個支原體篩查

2020-10-15 締一0601

細胞培養是實驗室的常規操作和科研基礎。其中，保證細胞不受支原體的汙染是決定實驗成敗的重要環節。然而，支原體汙染細胞的發生率又非常高,有報導高達63%。

那麼，這些支原體汙染是從哪裡來的呢？

常可見以下來源：

特別是支原體的汙染能通過細胞操作產生的氣溶膠或液滴傳播。一瓶被支原體汙染的細胞足以威脅到其他培養的細胞。因此，定期對細胞培養基、細胞培養上清進行支原體的監測是非常重要的。


在支原體的各種檢測方法中，常規PCR法以其

①靈敏度高，特異性好；

②時間短，2-3小時出結果；

③操作簡單；

④無須昂貴儀器等特點廣受青睞。


但不同廠家生產的試劑盒質量差異較大（由於引物及內在設計不同），需謹慎選擇，儘量在專業人員推薦指導下使用。


這裡小編向您推薦的是德國Minerva Biolabs公司的常規PCR檢測試劑盒（一步法）（英文名：Venor®Gem OneStep），它經過許多用戶使用過，廣受好評。



產品介紹

其中貨號11-8025、11-8050為常備現貨。




優勢

①高特異性。如存在支原體汙染，則只在270bp左右有一條陽性條帶，無雜帶現象，方便辨識。對其他物種如細菌、真核生物DNA無交叉反應。


②可檢測的支原體種類豐富。支原體屬柔膜體綱、支原體目，下分為支原體科、無膽甾原體科和脲原體科，一共有100多種。Venor®Gem一步法試劑盒可檢測85種支原體科成員(含所有汙染細胞的常見支原體)、7種無膽甾原體和1種脲原體，十分全面。


③所需樣本量少，僅需2ul。


④靈敏度高，靈敏度高，即使每個反應只有20個基因組拷貝，也可以檢測出來。


⑤結果可靠。檢測時含陰性對照、陽性對照和內控對照，可避免假陰性和假陽性。


⑥試劑穩定，操作簡單。試劑盒內的PCR mix和陽性對照均為凍乾粉，穩定性強。只需復溶後即可立即使用，除樣品外，無須添加其他試劑。PCR mix已包含內控對照，無須再單獨添加（因此被稱為一步法）。



適用範圍

適用於支原體的篩查。適合細胞培養物和生物樣品，僅作研究使用，不適合藥廠的放行檢測。不適合臨床診斷。



操作步驟

第1步：樣本處理

第2步：試劑製備


第3步：PCR體系建立


第4步：啟動PCR反應


第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。


當樣本存在支原體汙染時，由於內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如當支原體DNA＞103拷貝時）。


當支原體DNA＞104拷貝時，內控對照條帶會完全消失。

在80-90bp可能存在引物退火形成的二聚體條帶，此條帶不影響檢測結果。


結果詮釋可依據下表


德國MB廠家簡介


德國MB公司，全稱Minerva Biolabs，是世界著名的微生物汙染控制公司，成立於1999年，總部位於德國柏林。

公司創始人來自於全球聞名的羅伯特·科赫微生物研究所。


二十年來，MB公司專注於微生物汙染檢測與清除，特別是支原體和軍團菌的技術和產品，在世界上遙遙領先。


  • 自1999年起即研發細胞培養和生物藥工業用QC檢測試劑
  • 配備生物安全二級實驗室
  • GMP級潔淨車間生產
  • 世界最大的支原體PCR檢測試劑供應商
  • IOM和PDA成員
  • ISO 9001和ISO 13485認證

註：IOM全稱Institute of Medicine

PDA全稱Parenteral Drug Association


2007年，上海威正翔禹生物科技有限公司作為MB公司的全國總代理，將支原體檢測防控的優秀產品引入中國。十幾年來，不斷為中國生物研究實驗室，以及眾多生物製藥企業，提供了完整高效的支原體等微生物檢測及祛除解決方案。

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  • 細胞培養的實驗室對支原體汙染預防有幾種預防
    下面筆者給您推薦幾個支原體防控的產品，僅供參考。這些都是德國Minerva Biolabs公司出品，在國際期刊上也具有很高的引用率。在循環水中倒入Water ShieldTM（1：200稀釋）即可有效地預防滋生，效果可持續1個月左右。
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  • 不可小看支原體汙染問題
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  • 細胞培養中的支原體汙染的預防及處理
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  • 細胞被支原體汙染是每個實驗室常見但不自知的事
    在此之前強調一下我的相關研究是有關衣原體的，而不是支原體。每次聽到別人問我，你的支原體做的怎麼樣的時候，雖然我嘴巴上給你解釋我做的是衣原體，但是我的內心是一萬隻草泥馬奔過的。所以看過這個分享的人要是再問我你做的支原體怎麼樣，我。。。。。。 　　這周主要講有關支原體汙染細胞的原因和樣子。